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熒光定量PCR反應(yīng)中的三種對照簡介

日期:2024-11-25 01:24
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摘要: 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中的空白對照 1、無模板空白對照 NTC是指不含有模板(陽性模板或者陰性模板)的對照。目前的試劑盒的NC一般都是水或陰性緩沖液,所以NC等同于NTC。其實(shí)兩者有不同的作用。 2、儀器空白對照 NTC是含有引物探針和反應(yīng)液主要監(jiān)控引物探針,反應(yīng)體系有沒有被污染。這里的儀器空白對照我通常使用的是空反應(yīng)管來監(jiān)控儀器有無非特異性的熒光信號。 3、熒光染料對照 zui 常使用的是ROX染料,由于熒光定量PCR的熒光信號在每...

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中的空白對照


1、無模板空白對照


NTC是指不含有模板(陽性模板或者陰性模板)的對照。目前的試劑盒的NC一般都是水或陰性緩沖液,所以NC等同于NTC。其實(shí)兩者有不同的作用。


2、儀器空白對照


NTC是含有引物探針和反應(yīng)液主要監(jiān)控引物探針,反應(yīng)體系有沒有被污染。這里的儀器空白對照我通常使用的是空反應(yīng)管來監(jiān)控儀器有無非特異性的熒光信號。


3、熒光染料對照

zui 常使用的是ROX染料,由于熒光定量PCR的熒光信號在每個(gè)樣品孔會有微小的差異所以使用特定的ROX熒光染料,系統(tǒng)可以根據(jù)ROX熒光染料的信號值來校準(zhǔn)每孔的熒光信號。