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PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散分析

日期:2024-11-25 01:03
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摘要: PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散分析: 1、酶量過(guò)高。減少酶量;酶的質(zhì)量差,調(diào)換另一來(lái)源的酶。 2、dNTP濃度過(guò)高。減少dNTP的濃度。 3、MgCl2濃度過(guò)高。可適當(dāng)降低其用量。 4、模板量過(guò)多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)<50ng,而基因組DNA則應(yīng)<200ng。 5、引物濃度不夠優(yōu)化。對(duì)引物進(jìn)行梯度稀釋重復(fù)PCR反應(yīng) 6、循環(huán)次數(shù)過(guò)多;增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30,縮短退火時(shí)間及延伸時(shí)間,或改用二種溫度的PCR循環(huán)。 7、退火溫度過(guò)低。 8、電泳體系有問(wèn)題:①凝膠中...

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散分析:


1、酶量過(guò)高。減少酶量;酶的質(zhì)量差,調(diào)換另一來(lái)源的酶。

2、dNTP濃度過(guò)高。減少dNTP的濃度。

3、MgCl2濃度過(guò)高??蛇m當(dāng)降低其用量。

4、模板量過(guò)多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)<50ng,而基因組DNA則應(yīng)<200ng。

5、引物濃度不夠優(yōu)化。對(duì)引物進(jìn)行梯度稀釋重復(fù)PCR反應(yīng)

6、循環(huán)次數(shù)過(guò)多;增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30,縮短退火時(shí)間及延伸時(shí)間,或改用二種溫度的PCR循環(huán)。

7、退火溫度過(guò)低。

8、電泳體系有問(wèn)題:①凝膠中緩沖液和電泳緩沖液濃度相差太大;②凝膠沒有凝固好;③瓊脂糖質(zhì)量差。

9、若為PCR試劑盒則可能:①由于運(yùn)輸儲(chǔ)存不當(dāng)引起試劑盒失效;②試劑盒本身質(zhì)量有問(wèn)題,如引物選擇、循環(huán)參數(shù)等選擇不當(dāng)。

10、降解的陳舊模板擴(kuò)增也易產(chǎn)生涂布。