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簡述?單層貼壁細胞的凍存流程
日期：2024-11-25 01:55
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摘要：
簡述單層貼壁細胞的凍存流程：
1、確保細胞符合凍存標準——a) 外觀健康，形態(tài)學特征良好；b) 處于生長對數(shù)期；c) 無污染。
2、準備凍存管，每瓶細胞準備一支凍存管（凍存液配比=600μl培養(yǎng)基:300μl血清:100μl DMSO）。
3、胰酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管，準備離心
4、離心時，可加適量血清（5~10%）；
5、離心完成后，去除上清液，使用1200ul培養(yǎng)基吹勻離心管內(nèi)細胞；
6、離心管內(nèi)加入600μl血清，小心吹勻，減少氣泡產(chǎn)生；
7、逐滴加入...
簡述單層貼壁細胞的凍存流程：
1、確保細胞符合凍存標準——a) 外觀健康，形態(tài)學特征良好；b) 處于生長對數(shù)期；c) 無污染。
2、準備凍存管，每瓶細胞準備一支凍存管（凍存液配比=600μl培養(yǎng)基:300μl血清:100μl DMSO）。
3、胰酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管，準備離心
4、離心時，可加適量血清（5~10%）；
5、離心完成后，去除上清液，使用1200ul培養(yǎng)基吹勻離心管內(nèi)細胞；
6、離心管內(nèi)加入600μl血清，小心吹勻，減少氣泡產(chǎn)生；
7、逐滴加入DMSO共200μl（DMSO溶于水時大量放熱，避免局部過熱導致細胞熱損傷），小心吹若干下，混勻液體；
8、轉(zhuǎn)移細胞懸液進入凍存管，1ml/管，共2管；
9、凍存管梯度冷凍——4℃ 0.5h；-20℃ 2h凍存至固態(tài)；-80℃冰箱或液氮罐口（亦為-80℃）過夜，第2日再將凍存管沒入液氮。或使用梯度凍存盒，常溫下放入盒中，移入-80冰箱過夜，次日沒入液氮