注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。產品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產品名稱 |
致病性大腸桿菌熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015268 |
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區(qū)。
MCF-7/ER36細胞,人癌細胞 小鼠胰島素瘤β細胞(NOD/Lt轉基因小鼠,SV40巨T抗原),NIT-1細胞 MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞敵草腈(標準品)質量規(guī)格:分析標準品Dichlobenil
MKN-28(人胃癌高轉移細胞) 5×106cells/瓶×2乙二醇苯(標準品)質量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC)Ethylene glycol monophenyl ether
HUVEC Growth Medium 2pooled Pellet #N/A > 1 mio.cells 前脂肪細胞培養(yǎng)基PAM乙二醇苯(standard for GC,≥99.5%(GC))質量規(guī)格:standard for GC,≥99.5%(GC)Ethylene glycol monophenyl ether
CL-0399NCI-H295R(人腎上腺皮質腺癌細胞)5×106cells/瓶×2O-芐基-L-酪氨酸芐酯鹽酸鹽質量規(guī)格:0.985O-Benzyl-L-tyrosine benzyl ester
EPHA7
Others Rat 大鼠 EphA7 / EHK3 人細胞裂解液 (陽性對照) O-芐基-L-酪氨酸甲酯鹽酸鹽質量規(guī)格:0.985O-Benzyl-L-tyrosine methyl ester
IMR-32(人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×21,1'-二萘胺(>98.0%(HPLC)(N))質量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)1,1'-Dinaphthylamine
Promocell C-21060 Airway Epithelial Cell GrowthMedium, 呼吸道上皮細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml2,2'-二萘胺(>98.0%(GC))質量規(guī)格:>98.0%(GC)2,2'-Dinaphthylamine
人星形膠質細胞裂解物HAL1,2'-二萘胺(升華精制品)(>98.0%(HPLC)(N))質量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)1,2'-Dinaphthylamine (purified by sublimation)
HBEGF Others Human 人 HBEGF / D 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N,N',N''-三苯基-1,3,5-苯三胺(>98.0%(HPLC)(T))質量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)N,N',N''-Triphenyl-1,3,5-benzenetriamine
人結直腸腺癌細胞;SW620 [SW 620;SW-620]3-吲哚乙酸(IAA)質量規(guī)格:>98%,BR3-Indoleacetic acid
致病性大腸桿菌熒光PCR檢測試劑盒EB病毒轉化的人B細胞;HH-29血清兔抗羊IgGshēng huà shì jì容量:1000只/袋
ADAMTSL1 Others Human 人 ADAMTSL1 / PUNCTIN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 一水肌酸 Creatine Monohydrate,≥98% 6020-87-7 25G 通用試劑
CL-0413PC-3M-2B4(人前列腺癌低轉移細胞株)5×106cells/瓶×2錄化高鐵(陰涼);錄化鐵;三錄化鐵;錄化高鐵 Iron(III) chloridq solution;Iron (III) chloridq hydrctqd;Iron(III) chloridq;Fqrric sclts 1002-77-1
人絨毛間充質成纖維細胞 人皮膚成纖維細胞,HSF細胞 NOR-10(小鼠骨骼肌成纖維細胞)WATER,STERILE,NON-DEPC水HPLC級透明無色液體RTsigma
人T細胞白血病細胞;HuT 787789-75-5扶化鈣;扶石CalciuM fluoride;Fluorspar