注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
幽門螺旋桿菌熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015262 |
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
RK3 Others Mouse 小鼠 RK3 / kC 人細胞裂解液 (陽性對照) 磺胺二甲嘧啶質(zhì)量規(guī)格:≥99%,BRSulfamethazine
小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3磺胺二甲嘧啶 (標準品)質(zhì)量規(guī)格:≥99%,標準品Sulfamethazine
CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人細胞裂解液 (陽性對照) 糖精(標準品)質(zhì)量規(guī)格:校準溫度計用Saccharin
Caco-2,人結(jié)直腸腺癌細胞酚酞(標準品)質(zhì)量規(guī)格:熔點測定Phenolphthalein
NEI-H209細胞,小細胞肺癌細胞 人前列腺癌細胞,22RV1細胞 人脈絡叢成纖維細胞RNAHCPF miRNA5 μg磺胺(標準品)質(zhì)量規(guī)格:檢查Sulfanilamide
SLAMF6 Others Human 人 SLAMF6 / Ly108 人細胞裂解液 (陽性對照) L-鹽酸半胱酸,英文名或英文縮寫:L-Cysteine metxyl ester xy7nochloride,級別:BR,99%,規(guī)格:25克
CM-R082大鼠骨細胞完全培養(yǎng)基100mL加醋芐酯;蟻醋芐酯 Bqnzyl forMctq;ForMic ccid bqnzyl qstqr; 104-27-4
BSG823細胞,人胃癌細胞 人神經(jīng)上皮瘤細胞,SK-N-SH細胞 瘤牛皮膚細胞;BIN-S1葡聚糖凝膠 Sephade... Sephadex G-100 Medium 9050-94-6 25G 分離試劑
CNE(人鼻咽癌細胞) 5×106cells/瓶×2ABTSdiammoniumsalt2,2'-連氮基-雙-(3-乙基本并二氫噻唑啉-6-磺酸)二鹽5克超,98%
FCGR3B
Others Human 人 CD16b / FCGR3B 人細胞裂解液 (陽性對照) (順二酸鈉(馬來酸鈉))
幽門螺旋桿菌熒光PCR檢測試劑盒QBC-939, 人膽管癌細胞PVDF膜1 O.D.
CDK4 Others Human 人 CDK4 / CMM3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 5-錄-1-基-4-肖基咪坐 5-Chloro-1-mqthyl-4-nitnoimidczolq 4897-2-0
人永生化細胞;CNLMG-B5538LCL-精酸L-谷酸鹽1公斤
NCI-N87細胞,人胃癌細胞 人細胞與倉鼠肺細胞雜交細胞,FD6細胞 CL-0387MS751(人頸表皮癌細胞)5×106cells/瓶×2司盤6025毫克2~8℃
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA(酸鈉)