參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
馬傳染性貧血病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號(hào) |
BJ-R015240 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
JEG-3/VP16細(xì)胞,人絨癌細(xì)胞耐藥株 新生牛眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞,NBTF細(xì)胞 人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞HAMSC羅丹明123質(zhì)量規(guī)格:用于熒光標(biāo)記Rhodamine 123
IM-9(人外周血B細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2曲美布汀堿質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTrimebutine base
95-D(人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H099人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 人胚肺成纖維細(xì)胞;CCC-HPF-1環(huán)草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品Siduron
CM-R039大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL西瑪津(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品Simazine
HA Others
H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 西瑪津標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%)質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=5%Simazine solution
人低分化肺腺癌細(xì)胞;GLC-82 [GLC82]琥珀酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定Hydrocortisone succinate
ENG Others Human 人 Endoglin / CD105 / ENG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 回拉西坦;茴拉西坦(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定Aniracetam
兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-2卡絡(luò)磺鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Carbazochrome sulfonate
NGFR Others Mouse 小鼠 NGFR / P75 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 卡絡(luò)磺鈉質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCarbazochrome sulfonate
胰凝乳蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL表兒茶素沒食子酸酯質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,BRECG
馬傳染性貧血病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L2nitnosoRsalt亞硝基-R-鹽25克BS
NRP1 Others Human 人 NRP1 / Neuropilin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3-錄本加醋;間錄本加醋 3-Chlorobqnzoic ccid 232-80-8
CM-R084大鼠骨骼肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLMT金屬硫蛋白25克BR,1u/mg,液體
TYRP1 Others Human 人 P1 / TYRP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) CHC碳酸鹽500克BR,20%
小鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL過銨;過二銨;高銨AMMoniuM persulfate;APS;PER
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研