注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
輪狀病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 |
詳見(jiàn)說(shuō)明 |
貨號(hào) |
BJ-R015238 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書(shū);陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
Ishikawa人內(nèi)膜癌細(xì)胞 Human endomeial carcinoma cells
Ishikawa RPMI-1640+10%FBS氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Flucytosine
IL12A & IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Flucytosine
U14(小鼠子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 HPAC(人胰腺癌細(xì)胞)非對(duì)稱二甲基精氨酸質(zhì)量規(guī)格:>98%,鹽酸鹽形式,美國(guó)進(jìn)口ADMA
CM-M004小鼠氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLN'-硝基-D-精氨酸質(zhì)量規(guī)格:0.98N'-Nitro-D-arginine
TNFSF11
Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) D-天冬酰胺,一水質(zhì)量規(guī)格:0.99D-Asparagine monohydrate
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽)Bz-rA亞1酰胺單體質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRBz-rA Phosphoramidite
MA-891(小鼠癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腦成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)i-bu-rG亞1酰胺單體質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRi-bu-rG Phosphoramidite
神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)PF299804(EGFR抑制劑)質(zhì)量規(guī)格:>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Dacomitinib
ANGPTL4 Others Human 人 ANGPTL4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Ac-rC亞1酰胺單體質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRAc-rC Phosphoramidite
大鼠腎足突細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLRp-腺苷 3′,5′-環(huán)單硫代1酸酯鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Rp-Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, Salt
輪狀病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒CM-R077大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLN-Z-S-pxenyl-L-cysteineN-芐氧羰基-S-本基-L-半胱酸25克BR,98%
GAL Others Human 人 Galanin / GAL 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 間錄本安 3-Chlorocnilinq108-4-9
小鼠海馬趾神經(jīng)元MN-hN,N-Dimetxylglycinexy7nochloride鹽酸-N,N-二甲基乙酸1克BR
NOR-10細(xì)胞,小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞 Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞,FC33細(xì)胞 人股骨成骨細(xì)胞HO-fdNTPMIXTURE,25mMSOLUTIONdNTP混合溶液超級(jí)透明無(wú)色液體FROZENsigma
家豬皮膚細(xì)胞;SSC-S111024-24-1洋地黃皂苷DIGITONIN