參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng) |
FluA/FluB/pdmH1N1(HA)/H3N2(HA) 亞型流感病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱(chēng) |
詳見(jiàn)說(shuō)明 |
貨號(hào) |
BJ-R015201 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書(shū);陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
NRG1 Others Human 人 NRG1-alpha (EGF Domain) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (1R,2S)-1-氨基-2-茚醇 質(zhì)量規(guī)格:0.98(1R,2S)-(+)-cis-1-Amino-2-indanol
小鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN-BOC-D-色氨醇質(zhì)量規(guī)格:BR,>98%N-Boc-D-tryptophanol
MADB-106大鼠癌細(xì)胞 Breast cancer cells of MADB-106 rats 1640+10% FBSDL-苯甘氨醇 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR2-Phenylglycinol
IL1RN Protein Human 重組人 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)甘氨酸-L-亮氨酸 質(zhì)量規(guī)格:0.98Glycyl-L-leucine
Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 AAV-293( 胚腎細(xì)胞)Amberlyst 15離子交換樹(shù)脂(干)質(zhì)量規(guī)格:干Amberlyst 15 ion-exchange resin
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類(lèi));Pan02-CAG-tTA-2D1D-基葡萄糖鹽酸鹽shēng huà shì jì容量:25克
QGY-7701細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 人羊膜細(xì)胞,HA細(xì)胞 大鼠癌細(xì)胞;SHZ-884,4-二典聯(lián)本 4,4'-Diiodobiphqnyl3001/12/8
KG-1(人急性骨髓性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2CBZ-D-谷酸shēng huà shì jì容量:25克
Promocell C-25215 Hepatocyte Basal Medium (prf), 肝細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基,無(wú)酚紅 500mlpotewwiumchromate酸二鉀5克CP
人腎小管上皮細(xì)胞;HKC70700-30-0腺嘌呤1酸鹽;6-基嘌呤1酸鹽;維生素B4;1酸腺素Adenine phosphate;VitaMin B4
FluA/FluB/pdmH1N1(HA)/H3N2(HA) 亞型流感病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒CL-0404NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2(±)-Carnitinexy7nochloride混旋肉堿鹽酸鹽1克AR,99%
NRK-52E,大鼠腎細(xì)胞 Sars蛋白表達(dá)株,293sars181A細(xì)胞 NCI-H1703 [H1703](人肺癌細(xì)胞)鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液 Cobclt 7440-48-4
人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M-2B4pxenidone尼酮5毫克IND
BSG Others Mouse 小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-精酸100克
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMYFAMPNa2 5g/25g/100g/500g原裝 Amresco 0634
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研