抗體的制備過程:
1. M Y原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為M Y原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有M Y原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. M Y動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量**時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. M Y血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. M Y血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. M Y血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 |
Anti-SPHK2抗體 |
規(guī) 格 |
0.2ml/200μg |
貨號 |
BJ-K95788 |
英文名稱 Anti-SPHK2
中文名稱 鞘氨醇激酶2抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
別 名 sphingosine kinase 2; SK 2; SPK 2; C76851; MGC102297; SPHK2_HUMAN.
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶 細(xì)胞分化
蛋白分子量 predicted molecular weight: 72 kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human SPHK2 C-terminus
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
對照/標(biāo)本無染色 產(chǎn)品僅用于科研
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入,是否孵育了足夠的時間。
③ 對照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點是非常重要的。比如,如果一抗是兔來源的抗體,二抗一定要用抗兔的二抗來匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融,試劑保存時一定要避免與揮發(fā)性有機(jī)溶劑同放一室,以免降低抗體的效價。
⑥ 檢查標(biāo)本的儲存條件,好用已知陽性的標(biāo)本來同時做陽性對照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,簡單的檢測方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化,則可排除底物的因素。需要注意的是,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時間內(nèi)用完,否則會失效。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,溶液的pH值很重要,與過氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉。
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配。
弱陽性
如果陰性對照沒有染色而陽性對照標(biāo)本弱陽性,除了考慮上述因素外,還應(yīng)考慮:
① 標(biāo)本的固定方式,不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r溫度過高,都會影響到所檢測的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。
② 不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式,由于石蠟切片在制作的過程中固定劑對抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時使用的抗原雙暴露法,至于使用哪一種方法,應(yīng)參照**廠家的說明,同時結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定。
③ 抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時間是否正確。一般試劑**廠家都會對試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標(biāo)本來自各種組織,處理過程也不盡相同,所以應(yīng)參照使用范圍,對所使用的一抗進(jìn)行梯度測試,找出佳的使用濃度。
④ 切片上了過多的沖洗液,當(dāng)抗體加至切片上時,等于人為地對抗體進(jìn)行了進(jìn)一步的稀釋。
⑤ 孵育時切片是否放置水平,否則會導(dǎo)致抗體流失。
如果陰性對照沒有反應(yīng),陽性對照反應(yīng)良好,而標(biāo)本弱陽性,則可能是由于陽性對照不是同一種咨詢組織、或固定方式不同等原因所致。
anti-PDI/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Avidin/FITC 熒光素標(biāo)記親合素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
表皮生長因子受體抗體 Anti-EGF-R 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
FAF1 英文名稱: Fas相關(guān)1因子抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355) 0酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格 0.1ml
Avidin/FITC 熒光素標(biāo)記親合素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-Nur77/GFRP/FITC 熒光素標(biāo)記孤兒核受體蛋白Nur77抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Guinea IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗豚鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
L選擇素抗體 Anti-CD62L 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml
Fibrinogen alpha chain 英文名稱: 纖維蛋白原A鏈抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PLCG 1/PLC gamma 1 0酯酶Cγ1抗體 規(guī)格 0.2ml
Goat Anti-Guinea IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗豚鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-SPHK2抗體兔子血小板活化因子elisa試劑盒 兔子血小板活化因子試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔子血小板活化因子試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子血小板活化因子試劑盒、兔子血小板活化因子eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Adefovir 中文名:阿德福韋 分子式:C8H12N5O4P
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