注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱： 塞尼卡谷病毒（SVV）核酸試劑盒說(shuō)明書(shū)

英文名稱:  詳見(jiàn)說(shuō)明
產(chǎn)品貨號(hào)： BJ-R014926

產(chǎn)品規(guī)格： 50T

產(chǎn)品分類： 熒光-PCR法

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)，無(wú)非特異性擴(kuò)增；

◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；

◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

      引物1（10pM）               2μl

      引物2（10PM）              2μl

      Taq酶（2U/μl）            1μl

      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

     加ddH2O至               50 μl

     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

使用方法：

注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書(shū)；陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取，可直接使用。

2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）

取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。

塞尼卡谷病毒（SVV）核酸試劑盒說(shuō)明書(shū)組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。

細(xì)胞毒 T 細(xì)胞相關(guān)抗原 4(CTLA-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Araliadiol  1354638-93-9  中文名：  分子式：C15H20O2  度：%  關(guān)鍵詞：  ; 食用土當(dāng)歸; 聚乙炔; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

細(xì)胞凋亡抑制因子BCL-2   英文名稱：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   BCL-2  Antipyrine  60-80-0  中文名：安替比林  分子式：C11H12N2O  度：99.0%   

細(xì)胞凋亡相關(guān)基因 -2(BCL-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   奧地利 Bender  Anthraquinone-2-carboxylic acid  117-78-2  中文名：蒽醌-2-羧酸  分子式：C15H8O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

細(xì)胞凋亡-Hoechst染色試劑盒   100次  Anthraquinone-1,5-disulfonic acid di salt  853-35-0  中文名：蒽醌-1,5-二磺酸二鈉鹽  分子式：C14H6Na2O8S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

細(xì)胞凋亡（TdT介導(dǎo)的原位末端切口平移雙標(biāo)記法）檢測(cè)   Vitamin E (VE) detection  Averantin  中文名：  分子式：C20H20O7  度：%

膠原酶I型(sigma)  Collagenase, Type1  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝 ELISAKitCys-C兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C規(guī)格：48T/96T

膠原酶II型(sigma)  Collagenase, Type2  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝 小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)ELISA試劑盒 ，英文名： M30 ELISA Kit

膠原酶IV型(sigma)  Collagenase, TypeIV  質(zhì)量規(guī)格：≥160 CDU/mg,Sigma分裝 小鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 96T/48T

鉬酸鈉二水(AR)   molybdate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR 人肺炎衣原體抗體IgM(Cpn-IgM)試劑盒 Human Chlamydia pneumoniae aibody,Cpn-IgM ELISA Kit

硅酸鎂（高）  Magnesium silicate  質(zhì)量規(guī)格：>98% RatLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-抗壞血酸鈉   L-ascorbate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR CMV(CYTOMEGALOVIRUS)病毒標(biāo)準(zhǔn)曲線定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒2

焦鈉(AR)   pyrophosphate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR Mousemyeloperoxidase,MPOELISA試劑盒小鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

碳酸氫銨(AR)  Ammonium bicarbonate  質(zhì)量規(guī)格：AR 小鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA 試劑盒

氯化銨(AR)  Ammonium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR Rat noradrenaline (NA) ELISA Kit 大鼠去甲(NA)ELISA試劑盒

水楊酸(AR)  Salicylic acid  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR Humanurokinase-typeplasminogenactivator,uPA/PLAUELISAKit 人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

鹿紅細(xì)胞膜蛋白elisa試劑盒   鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒、鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Buergerinin G  中文名：  分子式：C9H12O4  度：%

鱸魚(yú)溶菌酶/胞壁質(zhì)酶   英文名稱：   Lysozyme /Muramidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   Lysozyme  Artesunate  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8 

鱸魚(yú)皮質(zhì)醇   英文名稱：   Coisol   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CO  Artesunate  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8  度：98.0%

硫氧還蛋白氧化還原酶（xR）測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  Venlaine   99300-78-4  中文名：鹽酸文拉法辛  分子式：C17H28ClNO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶（TPX）試劑盒   紫外分光光度法   50管/48樣              Rengyol  93675-85-5  中文名：連翹環(huán)己醇  分子式：C8H16O3