注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱: 庫(kù)蠓通用PCR檢測(cè)試劑盒原理
英文名稱: Culicoides
spp.PCR
產(chǎn)品貨號(hào): BJ-R013520
產(chǎn)品規(guī)格: 50T
產(chǎn)品分類: PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書;陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
庫(kù)蠓通用PCR檢測(cè)試劑盒原理組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
突觸核蛋白 英文名稱: Human α Synucleinα 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: α-SYN
4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide 52298-44-9 中文名:4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺 分子式:C14H16N2O4S 度:99.0% 關(guān)鍵詞:
頭孢芐
1g Amprolium 中文名:鹽酸氨丙林 分子式:C14H20Cl2N4 度:98.0%
銅蘭蛋白(CP)檢測(cè) Glamate detection β-Anhydrouzarigenin 3080-20-4 中文名: 分子式:C23H32O3
銅-ATP酶(Cu-ATPase)測(cè)定試劑盒(比色法)
Repaglinide ethyl ester 14
銅(Cu)測(cè)定試劑盒(絡(luò)合比色法) Xanthopurpurin 518-83-2 中文名:1,3-二羥基蒽醌 分子式:C14H8O4 度:97.0% 關(guān)鍵詞:
PUC19 DNA/MSPI
(HPAII) MARKER 50ug 核酸凝膠電泳和印跡
PUC19 DNA/MSPI
(HPAII) MARKER 5x50ug 核酸凝膠電泳和印跡
PUC19
DNA/MSPI(HPAII), Ready-to-use 50ug 核酸凝膠電泳和印跡
GENERULER 100BP
DNA LADDER 50ug 核酸凝膠電泳和印跡
GENERULER 100BP DNA LADDER 5x50ug 核酸凝膠電泳和印跡
人含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5(FNDC5)PCR檢測(cè)試劑盒 別稱:FRCP2 Human FNDC5(Fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測(cè)Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組FNDC5濃度