注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱: 牛痘病毒PCR檢測試劑盒實驗步驟
英文名稱: Cowpox
Virus(CPV)PCR
產(chǎn)品貨號: BJ-R013507
產(chǎn)品規(guī)格: 50T
產(chǎn)品分類: PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
牛痘病毒PCR檢測試劑盒實驗步驟組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
嗜酸粒細(xì)胞直接計數(shù)液
Product name said
3-tert-Butoxycarbony-2-(4-anisyl)-4-phenyl-5-oxazolidinecarboxylic
acid 196404-55-4 中文名: 分子式:C22H25NO6 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
嗜肺軍團(tuán)桿菌(LP)核酸檢測試劑盒 48T
3-Quinuclidinone 3731-38-2 中文名:3-奎寧環(huán)酮 分子式:C7H11NO 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白1 英文名稱: Human
Retinoblastoma Protein 1 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: RBP1
4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene 2397-00-4 中文名:4,4'-雙(5-甲基-2-苯并惡唑基)芪 分子式:C30H22N2O2
食品DNA提取試劑盒 50T
3-Oxo-4-aza-5-alpha-androstane-17β-carboxylic
acid 103335-55-3 中文名: 分子式:C19H29NO3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
十六烷基基溴化胺 50g 3-O-Methyl-Estrone 1624-62-0 中文名:3-氧甲基基雌酮 分子式:C19H24O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
Binding Buffer for
GeneJET Gel Extraction Kit 150ml DNA純化
Wash Buffer for
GeneJET Gel Extraction Kit DNA純化
Maxima First
Strand cDNA Synthesis Kit Reaction Mix (5X)
0.8ml cDNA文庫和文庫構(gòu)建
ATP Solution, Tris
buffered 0.25ml 核酸標(biāo)記&Oligo合成、PCR
CTP Solution, Tris buffered 0.25ml 核酸標(biāo)記&Oligo合成、PCR
人骨髓前體抑制因子1(MPIF-1/CCL23)PCR檢測試劑盒 別稱:CCL23, SCYA23, Ckb-8, MPIF-1, MIP-3, CKb8 Human MPIF-1/CCL23(Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 1) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組MPIF-1/CCL23濃度