注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):鮑肌肉萎縮癥病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Abalone Shriveling Syndromeassociated Virus(AbSV)PCR
產(chǎn)品貨號(hào):BJ-R013211
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書(shū);陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;
9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus(MRSA)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌LAMP試劑盒
Microsporum canis 犬小孢子菌LAMP試劑盒
Microsporum gypseum石膏樣小孢子菌LAMP試劑盒
Microsporum nanum納米小孢子菌LAMP試劑盒
Microsporum spp.小孢子菌屬通用LAMP試劑盒
Middelburg Virus米德?tīng)柋げ《綬T-LAMP試劑盒
Middle East Respiratory Syndrome-Coronavirus(MERS-CoV)中東呼吸綜合征冠狀病毒RT-LAMP試劑盒
Mikrocytos mackini馬可尼小囊蟲(chóng)LAMP試劑盒
Milker's Nodule Virus(MNV)擠奶工結(jié)節(jié)病毒LAMP試劑盒
Mima polymorpha多態(tài)小小菌LAMP試劑盒
Mink Enteritis Virus(MEV)水貂病毒性腸炎病毒LAMP試劑盒
Mobala Virus(MOBV)莫巴拉病毒RT-LAMP試劑盒
Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA)改良安卡拉痘苗病毒LAMP試劑盒
Molluscum Contagiosun Virus(MCV)傳染性軟疣病毒LAMP試劑盒
Monkey Pox Virus(MPV)猴痘病毒LAMP試劑盒
Mopeia Virus(MOPV)莫佩亞病毒RT-LAMP試劑盒
Moraxella bovis牛莫拉氏菌LAMP試劑盒
Moraxella bovoculi牛眼莫拉氏菌LAMP試劑盒
Moraxella catarrhalis卡他莫拉菌LAMP試劑盒
Moraxella ovis綿羊莫拉菌LAMP試劑盒
Moraxella spp.莫拉氏菌屬通用LAMP試劑盒
Morganella morganii摩氏摩根菌LAMP試劑盒
Mouse Hepatitis Virus(MHV)小鼠肝炎病毒RT-LAMP試劑盒
豬粘蛋白/粘液素2(MUC2)試劑盒 phospho-ATF2 (Thr69/71) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
豬粘蛋白/粘液素1(MUC1)免試劑盒 Phospho-ATP1A1 (Tyr10) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
豬早老素2(PS-2)免劑盒 Phospho-ATP1A1 (Ser16) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
豬早老素1(PS-1)免劑盒 Acetyl CoA Carboxylase 乙酰輔酶A羧化酶抗體
豬載脂蛋白E(Apo-E)試劑盒 Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78) 磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體
豬載脂蛋白B100(apo-B100)試劑盒 Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860) 磷酸化Ack1抗體
豬載脂蛋白A5(apo-A5疫試劑盒 phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
鮑肌肉萎縮癥病毒PCR檢測(cè)試劑盒豬載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒 phospho-AMPK beta 1 (Ser108) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
豬甾體合成急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)免o-ATM(Ser1981) 磷酸化****擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體
豬誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)劑盒 phospho-ATP citrate lyase (Ser455) 磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體
豬游離脂肪酸(FFA)試劑盒 phospho-ATR (Ser428) 磷酸化ATR抗體
豬游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)試劑盒 AMN1 細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體
豬游離甲狀腺素(FT4)試劑盒 ALG11 天門(mén)冬酰胺連接糖基化11抗體
豬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)疫試劑盒 ASF1A 細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體
豬胰高血糖素樣肽2(GLP2)試劑盒 AGPHD1 氨基糖苷類(lèi)磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
豬胰高血糖素樣肽1(GLP1)試劑盒 ASGPR1 唾液酸糖蛋白受體1抗體
豬胰高血糖素(GC)試劑盒 ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體