細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
COLO320 HSR細(xì)胞 |
規(guī)格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BJ-100349 |
服務(wù)描述:
公司提供委托細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù),細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)試劑盒 Human cicaicial Pemphigoid,CP ELISA Kit 甘油三油酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Glycerine trioleate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratα-Glucosidase,a-GluELISAKit大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 長春花堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Vinblastine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
P1噬菌體培養(yǎng)試劑盒10 長春花堿 Vinblastine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,BR
PorcineIerleukin1α,IL-1αELISA試劑盒豬白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 脫水長春堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Anhydrovinblastine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠骨成型蛋白2(BMP2)ELISA試劑盒 ,英文名: BMP2 ELISA Kit 長春新堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Vincristine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA檢測試劑盒HumanAquaporin0,AQP-0ELISAKit 96T/48T 硫酸金雀花堿;硫酸司巴?。?biāo)準(zhǔn)品) Sparteine sulfate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠水閘蛋白1(Cldn1)試劑盒 Rat Claudin-1,Cldn1 ELISA kit 高烏甲素(標(biāo)準(zhǔn)品) Lappaconitine 質(zhì)量規(guī)格:滴定法≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱RatCA153ELISAKit大鼠癌標(biāo)志物(CA153)規(guī)格:96T/48T 番茄紅素(標(biāo)準(zhǔn)品) Lycopene 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥90%,標(biāo)準(zhǔn)品,充氮氣保護(hù)
活化蛋白C(APC)活性熒光定量檢測試劑盒20 苔黑酚葡萄糖苷;地衣二醇葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Orcinol glucosid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
ELISAKitSmad7人信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7規(guī)格:48T/96T 短葶山麥冬皂苷C(標(biāo)準(zhǔn)品) Liriope muscari baily saponins C 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
3168/1/2
Hydroxyhexamide ((±)-Hydroxyhexamid) 10mg Rhizoma
curculiginis仙茅LAMP鑒定試劑盒
3168/1/2 Hydroxyhexamide ((±)-Hydroxyhexamid) 10mM*1mLinDMSO Rhizoma curculiginis仙茅LAMP鑒定試劑盒
3168/1/2 COLO320 HSR細(xì)胞 Hydroxyhexamide ((±)-Hydroxyhexamid) 2mg Rhizoma cyperi香附LAMP鑒定試劑盒
3168/1/2 Hydroxyhexamide ((±)-Hydroxyhexamid) 5mg Rhizoma cyperi香附LAMP鑒定試劑盒
3200/6/4 Naftidrofuryl oxalate (Nafronyl oxalate
salt) 100mg Herba agrimoniae仙鶴草LAMP鑒定試劑盒
體食管癌組織提取物【Cancer: Human
Esophageal Cancer Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
體結(jié)腸癌組織提取物【Cancer: Human Colon Cancer Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
體脂肪組織提取物【Fat: Normal Human Adipose Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg