細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產品名稱 |
PK-13細胞 |
規(guī)格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BJ-99456 |
服務描述:
公司提供委托細胞培養(yǎng)服務,細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務標準。
保存和應用:
客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
F.solaniRFLP基因分析試劑盒20 馬來酸二丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC)) Dibutyl maleate 質量規(guī)格:standard for GC,≥99.5%(GC)
Mouserudimealbovineserumalbumincheck-upELISA試劑盒小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 二甲基亞砜(Standard for GC,≥99.95%(GC)) Dimethyl sulfoxide 質量規(guī)格:Standard for GC,≥99.95%(GC)
小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒 ,英文名: G-CSF ELISA Kit 正癸醇(Standard for GC,≥99.5%(GC)) n-Decyl alcohol 質量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)
大鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒Ratcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit 96T/48T 琥珀酸二乙酯(standard for GC,≥99.6%(GC)) Diethyl succinate 質量規(guī)格:standard for GC,≥99.6%(GC)
人低密度脂蛋白受體相關蛋白4(LRP-4)抗體(IgG)試劑盒 Human LRP-4 IgG ELISA Kit 癸二酸二乙酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC)) Diethyl sebacate 質量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)
RatN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKit大鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 二十二烷(standard for GC,≥99.0%(GC)) Docosane 質量規(guī)格:standard for GC,≥99.0%(GC)
FAM蛋白標記試劑盒3(200微克/) 三十二烷(standard for GC,≥98.0%(GC)) Dotriacontane 質量規(guī)格:standard for GC,≥98.0%(GC)
MousesecretoryimmunoglobulinA,sIgAELISA試劑盒小鼠分泌型球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 正庚醇(Standard for GC,>99.5%(GC)) 1-Heptanol 質量規(guī)格:Standard for GC,>99.5%(GC)
小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 γ -丁內酯(GBL)(standard for GC,≥99.9%(GC)) 4-Hydroxybutanoic acid lactone 質量規(guī)格:standard for GC,≥99.9%(GC)
Rat ciliary neuroophic factor (CF) ELISA Kit 大鼠睫狀神經營養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒 丙位庚內酯(Standard for GC
,>98.5%(GC)) γ-Heptalactone 質量規(guī)格:Standard for GC
,>98.5%(GC)
1228111-63-4
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1228182-44-2
Cimaterol-d7 5mg Septoria petroselini歐芹殼針孢葉斑病菌PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
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