冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品描述：公司科技提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

鈣離子膜通道鈣泵PMCA(P型ATP酶/質(zhì)膜)功能熒光檢測試劑盒20 新亞銅試劑鹽酸鹽一水合物(99%)  Neocuproine  monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：0.99

ELISAKitLAM人脂阿拉伯甘露聚糖規(guī)格：48T/96T 化鉀(光譜SP)  Potassium bromide  質(zhì)量規(guī)格：光譜SP

小鼠細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒 ，英文名： LFA-3/CD58 ELISA Kit 偶氮胂Ⅰ水合物(90%)  Arsenazo I Hydrate  質(zhì)量規(guī)格：0.9

大鼠雌(E)ELISA檢測試劑盒Ratesogen,EELISAKit 96T/48T 無水硫酸鈉(SP)   sulfate anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：SP

人低氧誘導(dǎo)因子2(HIF-2)試劑盒 Human HIF-2 ELISA kit 二甲基砜(核磁共振定量標(biāo)準(zhǔn)品)  Dimethyl sulfone  質(zhì)量規(guī)格：核磁共振定量標(biāo)準(zhǔn)品

Ratniicoxidesyhase,NOSELISAKit大鼠合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 1,3-(標(biāo)準(zhǔn)品)  1,3-Propanediol  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

ERK蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25 順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  DHA  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

MouseResistinELISA試劑盒小鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 二甲硝咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dimetridazole  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠細(xì)胞功能關(guān)聯(lián)抗原2(LFA2)ELISA試劑盒 ，英文名： LFA2 ELISA Kit 青霉素V鉀(標(biāo)準(zhǔn)品)  Penicillin V potassium salt  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人組織蛋白酶D(cath-D)ELISA檢測試劑盒HumancathepsinD,cath-DELISAKit 96T/48T 2-NP-AOZ(標(biāo)準(zhǔn)品)  2-NP-AOZ  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
1977/7/7  Dopamine serotonin antagonist-1  50mg  SARS-CoV-2（新冠病毒）N基因探針法熒光定量RT-PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負(fù)20度

1977/9/8  Phenolphthalein  10mM*1mLinDMSO  Simian Foamy Virus(SFV)猴泡沫病毒RT-LAMP試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負(fù)20度

1977/9/8  Phenolphthalein  1g  SARS-CoV-2（新冠病毒）N基因RT-PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負(fù)20度

1982/8/6  Rottlerin  10mg  Coxsackie Virus(CVA6)柯薩奇病毒CVA6型變種RT-PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負(fù)20度

1982/8/6  Rottlerin  10mM(in1mLDMSO)  Coxsackie Virus(CVA6)柯薩奇病毒CVA6型變種RT-LAMP試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負(fù)20度
NCI-H460：大細(xì)胞肺癌細(xì)胞說明書 規(guī)格T25m2

NCI-N87:胃癌細(xì)胞培養(yǎng) 規(guī)格T25m2

NCTC 1469：小鼠正常肝細(xì)胞保存 規(guī)格T25m2
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2COLO320細(xì)胞.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。