細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構、生命活動等。
2.研究條件可以為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品名稱 |
無血清細胞凍存液 |
規(guī)格 |
100ml |
貨號 |
BJ-X64935 |
無血清細胞凍存液
英文名稱:
規(guī)格:100ml
服務描述:
公司提供委托細胞培養(yǎng)服務,細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務標準。
保存和應用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
鎢硅酸(>98%,BR)Silicotungstic acid hydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR ELISAKitGHRP山羊生長釋放多肽規(guī)格:48T/96T 血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)ELISA試劑盒 ,英文名: VE-cad ELISA Kit
乙酸銀(>99%,BR)Silver acetate質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 小鼠凝溶膠蛋白(GS)ELISA試劑盒 ,英文名: GS ELISA Kit MouseFibrinogen,FbgELISA試劑盒小鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大黃素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷(標準品)Emodin-8-glucoside質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA檢測試劑盒Humanhemeoxygenase1,HO-1ELISAKit 96T/48T ELISAKitLPO豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶規(guī)格:48T/96T
異蓮心堿(標準品)Isoliensinine質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 大鼠游離原卟啉(FEP)試劑盒 Rat Free
erythrocyte proloporphyrin,FEP ELISA Kit
Cheraxquadricarinatuslipovitellin/vitellin,Lv/VnELISAKit紅螯光殼螯蝦卵黃脂1蛋白/卵黃1蛋白(Lv/Vn)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
三苯甲基坎地沙坦西來替昔酯質(zhì)量規(guī)格:>99%Trityl
candesartan cilexetil ELISAKitET-1內(nèi)皮素1規(guī)格:48T/96T 尿酸含量測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
他莫昔芬質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRTamoxifen 小鼠R-脊椎蛋白1(RSPO1)ELISA試劑盒 ,英文名: RSPO1 ELISA Kit RatNeuroophin3,-3ELISA試劑盒大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
頭孢替安鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格:>800 μg/mg,USPCefotiam 血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA檢測試劑盒HumanSerumamyloidA,SAAELISAKit 96T/48T Humanhighmobilitygroupprotein17,HMG-17ELISA試劑盒高速泳動蛋白17(HMG-17)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
無血清細胞凍存液頭孢替安鹽酸鹽(標準品)質(zhì)量規(guī)格:效價測定Cefotiam 大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)試劑盒 Rat peroxisome
proliferators activator receptors alpha,PPAR-α ELISA Kit
Humanmacrophagechemotaticfactor,MCFELISAKit巨噬細胞趨化因子(MCF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng) 規(guī)格5×105
大鼠心室肌細胞保存 規(guī)格5×105
大鼠心肌組織提取物【Rat Heart: Normal Heart Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg