冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
中國倉鼠肺細胞
產(chǎn)品英文:CHL
細胞培養(yǎng)條件:DMEM+10%FBS +1%P/S
生長狀態(tài):貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃)37
運輸溫度(℃):常溫
產(chǎn)品描述:公司科技提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
中國倉鼠肺細胞 |
規(guī)格 |
1×106 |
貨號 |
BJ-X64609 |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
鹽酸美利曲辛(標準品)質量規(guī)格:含量測定Melitracen HumanCompleme1q,C1qELISA試劑盒人補體1q(C1q)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 大鼠細胞因子信號轉導抑制因子1(SOCS-1)ELISA試劑盒 ,英文名: SOCS-1 ELISA Kit
咪唑斯?。藴势罚┵|量規(guī)格:HPLC法含量測定Mizolastine 組織a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性CNPG3比色法定量檢測試劑盒20 人乙型肝炎病毒前S2抗體(HBVpreS2Ab)ELISA檢測試劑盒humanhepatitisBvirus,HBVpreS2AbELISAKit 96T/48T
地氯雷他定(標準品)質量規(guī)格:UV法含量測定Desloratadine Humanpunjecellaoaibody,PCA-1/YoELISAKit人抗浦肯野細胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 大鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)試劑盒 Rat Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA KIT
糠酸莫米松(標準品)質量規(guī)格:鑒別Mometasone Furoate 小鼠CD8分子(CD8)ELISA試劑盒 ,英文名: CD8 ELISA
Kit
CLIAKitforS100A8(humanS100calciumbindingproteinA8/calgranulinA)ELISAKit人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A規(guī)格:48T/96T
頭孢克1質量規(guī)格:>98%,BRCefixime Rat platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit 大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒 石蠟切片組織RHO蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20
NDSB 256(>98%,BR)質量規(guī)格:>98%,BRNDSB 256 Humanai-respiratorysyncytialvirusaibody,RSVELISAKit 人抗呼吸道合胞病毒抗體(RSV)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 ELISAKitPHSA人多聚血清蛋白規(guī)格:48T/96T
NDSB-211質量規(guī)格:BRNDSB-211 Humanfractalkine/CX3CL1ELISA試劑盒人趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 大鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
中性紅染色液質量規(guī)格:Ind GradeNeutral red solution(1X) 組織半胱氨酸蛋白酶-12(CASPASE-12)活性比色法定量檢測試劑盒20 人糖皮質受體β(GR-β)試劑盒 Human
glucocoicoid receptor-β,GR-β ELISA Kit
結腸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物【Human Colon
MatchPair: Normal Colonic Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell
Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
肺上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物【Human Lung MatchPair: Normal Pulmonary Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
組織提取物
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.中國倉鼠肺細胞研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。