細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠腸組織提取物 |
規(guī)格 |
50rxn/ 10μg/ 200μg |
貨號 |
BJ-X64439 |
小鼠腸組織提取物 【Mouse Intestine: Normal Intestinal Derivatives】
腸的功能是吸收水分,分泌粘液,并將食物殘渣形成糞便排出體外。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠腸組織中高質量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
服務描述:
公司提供委托細胞培養(yǎng)服務,細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務標準。
保存和應用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
VSIG8 Others Human VSIG8 細胞裂解液 (陽性對照) 參皂甙Rb3,英文名或英文縮寫:Ginsenoside Rb3,級別:BR,規(guī)格:25克
胚肺二倍體細胞;HEL-26-溴-1-己1 6-Bromo-1-hqxqnq 692-47-8
大鼠骨髓瘤細胞;IR983F 結腸腺癌細胞,Caco-2細胞 WEHI 164細胞,鼠纖維肉瘤細胞系乙二茶堿,英文名或英文縮寫:Aminophylline hydrate,級別:AR,規(guī)格:25克
GBC-SD, 膽囊癌細胞 Human氫氧化shēng huà shì jì容量:25克
CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 細胞裂解液 (陽性對照) (2-羥基磺酸))
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Egypt/
3300-NAMRU3/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照)
Gold(III)chloride三錄化金1克特,97%
胚肺成纖維細胞;HFL1言醋布比卡應 Bupivcccinq xy7nochloridq 73360-24-0
狗腎細胞;Super Tube 胚胎成纖維細胞,3T6-Swiss albino細胞 Hed68細胞,果子貍腎上皮細胞橄欖油 Olive oil (highly refined, low acidity) 8001-25-0 100ML 通用試劑
胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]EriochromeblueblackR依來藍R500克100s/盒
HA Others H4N6 甲型流感 H4N6 (A/mallard/Ohio/657/2002) 血凝素HA1
(Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) L-Histidine 5g/10g Sigma分裝
雜交瘤(B類);C3110D2B2無活菌素Nonactin質量規(guī)格:>98%,美國進口
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細胞裂解液 (陽性對照) 曲古柳菌素ATrichostatin A from Streptomyces sp質量規(guī)格:>98%,進分
臺盼藍TB羅布麻寧;小鼠腸組織提取物夾竹桃麻素(標準品)Acetovanillone質量規(guī)格:GC>98%,標準品
MAP2K1 Others Mouse 小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 羅布麻寧;夾竹桃麻素Acetovanillone質量規(guī)格:>98%,BR
結直腸癌細胞;T84虎杖甙/虎杖苷/白藜蘆醇苷Polydatin質量規(guī)格:HPLC>97%,BR