細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞提取物 |
規(guī)格 |
50rxn/ 5μg/ 200μg |
貨號 |
BJ-X64307 |
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞提取物 【Rat Bone: Normal Articular Chondrocyte Derivatives】
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞提取物是從大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞提取的,大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞從正常大鼠大鼠關(guān)節(jié)軟骨組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
服務(wù)描述:
公司提供委托細胞培養(yǎng)服務(wù),細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司科技提供的細胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
盤羊皮膚細胞;OAM-S13-羥基地氯雷他定質(zhì)量規(guī)格:美國進口3-Hydroxy Desloratadine
DLD-1細胞,結(jié)直腸腺癌上皮細胞 視網(wǎng)膜母細胞瘤,Y79細胞 導(dǎo)管癌細胞;ZR-75-30地氯雷他定-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進口Desloratadine-d4
HK-2(腎小管上皮細胞) 5×106cells/瓶×23-羥基地氯雷他定β-D-葡萄糖醛酸苷質(zhì)量規(guī)格:美國進口3-Hydroxy Desloratadine β-D-Glucuronide
ACVR2B Others Human ACVR2B / ActivinR-IIB 細胞裂解液 (陽性對照) 奧司他韋酸-d3 質(zhì)量規(guī)格:美國進口Oseltamivir-d3 Acid
成纖維細胞-新生兒cDNAHDF-n cDNA6-氯咪唑并[1,2-b]噠嗪質(zhì)量規(guī)格:>98%6-Chloroimidazo[1,2-b]pyridazine
HA細胞,羊膜細胞 產(chǎn)氣腸桿菌 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS3葡萄糖脫氫酶5克
IL8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-8 / CXCL8 蛋白7-羌基香豆速 7-xy7noxycoumcrin 93-32-6
NCI-H1650(非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) GENEPAGEPLUS8%EZSQZ.*CLDPAK*8% GENE-PAGE PLUS, 擠壓式瓶裝生物技術(shù)級5X75MLCOLD
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-1D32′-脫氧胞苷鹽酸100克
RNASET2 Others Human
RNASET2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (多聚半乳糖醛酸鈉)
小鼠B細胞雜交瘤細胞;W6/32十二烷基苯磺酸鈉(>95%,Tech
Grade) dodecylbenzenesulfonate質(zhì)量規(guī)格:>95%,Tech Grade
XCL1 Others Cynomolgus 食蟹猴 XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 硅酸鈉九水(>98%,BR) silicate hydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CM-M041小鼠肝星形細胞完全培養(yǎng)基100mL5-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷(>98%,BR)Bluo-Gal質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
U-2 OS, 大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞提取物骨肉瘤細胞 神經(jīng)母細胞瘤細胞,LAN-6細胞 COS-7(SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞)1酸氫二鈉二水Di hydrogen phosphate dihydrate質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
小鼠胚胎成纖維細胞;3T6-Swiss albino中性蛋白酶Neutral Protease from Bacillus polymyxa質(zhì)量規(guī)格:酶活:20萬u/g