細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠輸尿管上皮細(xì)胞提取物 |
規(guī)格 |
50rxn/ 5μg/ 200μg |
貨號 |
BJ-X64270 |
小鼠輸尿管上皮細(xì)胞提取物【Mouse Ureter: Normal Ureter Derivatives】
小鼠輸尿管上皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代輸尿管上皮細(xì)胞提取的,小鼠原代輸尿管上皮細(xì)胞從正常小鼠輸尿管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
服務(wù)描述:
公司提供委托細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù),細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
AE-1雜交瘤細(xì)胞抗AChE AE-1 hybridoma cells against AChE DMEM+10% Hyclone 滅**清Sp--腺苷 3′,5′-環(huán)單硫代1酸酯 三乙基銨鹽水合物質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Sp-Adenosine 3',5'-cyclic monophosphorothioate triethylammonium salt hydrate
IGF2BP2 Protein Human 重組 IGF2BP2 / IMP2 / p62 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)2-甲基硫代二1酸腺苷質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口2-(Methylthio)adenosine 5'-diphosphate 3 salt hydrate
Hce-8693(盲腸腺癌細(xì)胞(未分化)) 5×106cells/瓶×2 球狀少突細(xì)胞培養(yǎng)基OsM腺苷-2',3'-環(huán)1酸 三乙基銨鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Adenosine 2',3'-Cyclic Phosphate Triethylammonium Salt
神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)腺苷 3'-1酸 5'-1酰硫酸鋰鹽水合物質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Adenosine 3'-phosphate 5'-phosphosulfate lithium salt hydrate
CSK Others Human CSK /
C-Src kinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) rac (cis/trans)多奈哌齊N-氧化物質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口rac (cis/trans)
Donepezil N-Oxide
rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞 Rattus蛋黃粉shēng huà shì jì容量:100克
EPHA4 Others Mouse 小鼠 EPHA4 / HEK8 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羅紅霉素 Roxithromycin 80214-83-1 100G 通用試劑
表達(dá)小鼠MHCⅠ類分子Kb的胚腎細(xì)胞;293KB羌基鱗灰石 xy7noxycpctitq1306-06-2
DDR1 Others Human DDR1 Kinase / CD167 (aa 444-913) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) γ-MDH麥芽糖酶1克BR,20u/ul
CL-0372KATO III(胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2靛基質(zhì)NA
CGA Others Human
FSH alpha / TSH alpha / CGA 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 戊硫醇(標(biāo)準(zhǔn)品)n-Amyl mercaptan質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)
永生化表皮細(xì)胞;HaCaTAmberlite IR-120陽離子交換樹脂(鈉型)AmberliteIR-120質(zhì)量規(guī)格:鈉型
大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A 膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞,HCCC-9810細(xì)胞 C26細(xì)胞,小鼠結(jié)腸癌乙酸戊酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Amyl acetate質(zhì)量規(guī)格:for GC,≥99.5%(GC)
6-10B,小鼠輸尿管上皮細(xì)胞提取物 鼻咽癌細(xì)胞系 Human苯乙酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Acetophenone質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)
CES5A Others Mouse 小鼠 CES5 / Carboxylesterase-5 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 偶氮苯(標(biāo)準(zhǔn)品)Azobenzene質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品