服務描述：

公司提供委托細胞培養(yǎng)服務，細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：

客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司科技售后服務標準。

保存和應用：

客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
羅丹寧(>98%,Ind Grade)  Rhodanine  質量規(guī)格：>98%,Ind Grade 小鼠血管活性腸肽(VIP)ELISA試劑盒 ，英文名： VIP ELISA Kit

S-乙酰基硫代化膽堿(>99%,醫(yī)藥級)  S-Acetylthiocholine iodide  質量規(guī)格：>99%,醫(yī)藥級 小鼠血管緊張素1-7(Ang1-7)ELISA試劑盒 ，英文名： Ang1-7 ELISA Kit

N-丁二酸,S-乙?；鶐€基乙二醇酯(>98%,BR)  S-Acetylthioglycolic acid N-hydroxysuccinimide ester  質量規(guī)格：>98%,BR 小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

水楊醇(>98%,BR)  Salicyl alcohol  質量規(guī)格：>98%,BR 小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒MouseangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit 96T/48T

SB3-18  SB3-18  質量規(guī)格：BR 小鼠血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)ELISA試劑盒 ，英文名： AngⅠ ELISA Kit

氧化硒(>98%,Pract Grade)  Selenium (IV) oxide  質量規(guī)格：>98%,Pract Grade 小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒 ，英文名： Ang-Ⅰ ELISA Kit

芝麻酚(>98%,BC)  Sesamol  質量規(guī)格：>98%,BC 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA檢測試劑盒MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit 96T/48T

粗孔柱層析硅膠(20-60目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  質量規(guī)格：20-60目,層析用 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA試劑盒 ，英文名： ANGⅡ ELISA Kit

粗孔柱層析硅膠(100-200目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  質量規(guī)格：100-200目,層析用 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒 ，英文名： ANG-Ⅱ ELISA Kit

粗孔柱層析硅膠(300-400目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  質量規(guī)格：300-400目,層析用 小鼠血管緊張素Ⅱ受體2(AT2R)ELISA試劑盒 ，英文名： AT2R ELISA Kit
小鼠序列相似家族135成員B(FAM135B)ELISA試劑盒 ，英文名： FAM135B ELISA Kit 土耳其紅油  Red oil  質量規(guī)格：BR

小鼠序列相似家族3成員B(FAM3B)ELISA試劑盒 ，英文名： FAM3B ELISA Kit 倒千里光堿  Retrorsine  質量規(guī)格：>90%,進分

小鼠血管非炎性蛋白3(VNN3)ELISA試劑盒 ，英文名： VNN3 ELISA Kit 羅丹明B基(>97%,BS)  Rhodamine B base  質量規(guī)格：>97%,BS

小鼠血管活性腸肽(VIP)ELISA試劑盒 ，英文名： VIP ELISA Kit 羅丹寧(>98%,Ind Grade)  Rhodanine  質量規(guī)格：>98%,Ind Grade

小鼠血管緊張素1-7(Ang1-7)ELISA試劑盒 ，英文名： Ang1-7 ELISA Kit S-乙?；虼憠A(>99%,醫(yī)藥級)  S-Acetylthiocholine iodide  質量規(guī)格：>99%,醫(yī)藥級

小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 N-丁二酸,S-乙?；鶐€基乙二醇酯(>98%,BR)  S-Acetylthioglycolic acid N-hydroxysuccinimide ester  質量規(guī)格：>98%,BR

小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒MouseangiotensionⅠ,Ang-Ⅰ 96T/48T 水楊醇(>98%,BR)  Salicyl alcohol  質量規(guī)格：>98%,BR

小鼠血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)ELISA試劑盒 ，英文名： AngⅠ ELISA Kit SB3-18  SB3-18  質量規(guī)格：BR

小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒 ，英文名： Ang-Ⅰ ELISA Kit 氧化硒(>98%,Pract Grade)  Selenium (IV) oxide  質量規(guī)格：>98%,Pract Grade

小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA檢測試劑盒MouseangiotensionⅡ,ANG-Ⅱ 96T/48T 芝麻酚(>98%,BC)  Sesamol  質量規(guī)格：>98%,BC
PrimaCell?大鼠肺成纖維細胞試劑盒說明書 規(guī)格6次/盒

PrimaCell?大鼠支氣管平滑肌細胞試劑盒培養(yǎng) 規(guī)格6次/盒

PrimaCell?大鼠直腸平滑肌細胞試劑盒保存 規(guī)格6次/盒
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
PrimaCell?小鼠直腸平滑肌細胞試劑盒保存6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。