細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠主動脈平滑肌細胞實驗 |
規(guī)格 |
5×105 |
貨號 |
BJ-X63418 |
產(chǎn)品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
戊硫醇(標準品) n-Amyl mercaptan 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC) 牛β羥(βOHB)ELISA檢測試劑盒BovineBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 96T/48T
Amberlite IR-120陽離子交換樹脂(鈉型) AmberliteIR-120 質(zhì)量規(guī)格:鈉型 牛白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測試劑盒BovineIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 96T/48T
乙酸戊酯(標準品) Amyl acetate 質(zhì)量規(guī)格:for GC,≥99.5%(GC) 牛的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA檢測試劑盒Bovinerudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit 96T/48T
苯乙酮(標準品) Acetophenone 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC) 牛分泌型球蛋白A(sIgA)ELISA檢測試劑盒BovinesecretoryimmunoglobulinA,sIgAELISAKit 96T/48T
偶氮苯(標準品) Azobenzene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛固酮(ALD)試劑盒 Bovine aldosterone,ALD ELISA kit
酸洗石棉 Asbestos acid washed 質(zhì)量規(guī)格:AR 牛過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPARG)試劑盒 Bovine peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG ELISA kit
苊(標準品) Acenaphthene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC) 牛過氧化脂質(zhì)(LPO)試劑盒 Bovine lipid peroxide,LPO ELISA kit
鋁標準溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3) Aluminum solution 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3 牛核心蛋白聚糖(DCN)試劑盒 Bovine Decorin,DCN ELISA kit
鋁標準溶液(100μg/mL,基體:5%HCl) Aluminum solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體:5%HCl 牛壞死因子α(TNF-α)試劑盒 Bovine Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA kit
(+/-)-兒茶精(標準品) (±)-Catechin hydrate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛環(huán)0酸鳥苷(cGMP)試劑盒 Bovine cyclic
Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
牛ELISA試劑盒 煙嘧磺?。藴势罚?span> Nicosulfuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛β羥(βOHB)ELISA檢測試劑盒BovineBeta-HydroxybyricAcid,β-OHB 96T/48T 戊硫醇(標準品) n-Amyl mercaptan 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)
牛白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測試劑盒BovineIerleukin-2receptor,IL-2R 96T/48T Amberlite IR-120陽離子交換樹脂(鈉型) AmberliteIR-120 質(zhì)量規(guī)格:鈉型
牛的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA檢測試劑盒Bovinerudimealbovineserumalbumincheck-up 96T/48T 乙酸戊酯(標準品) Amyl acetate 質(zhì)量規(guī)格:for GC,≥99.5%(GC)
牛分泌型球蛋白A(sIgA)ELISA檢測試劑盒BovinesecretoryimmunoglobulinA,sIgA 96T/48T 苯乙酮(標準品) Acetophenone 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)
牛固酮(ALD)試劑盒 Bovine aldosterone,ALD ELISA kit 偶氮苯(標準品) Azobenzene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPARG)試劑盒 Bovine peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG ELISA kit 酸洗石棉 Asbestos acid washed 質(zhì)量規(guī)格:AR
牛過氧化脂質(zhì)(LPO)試劑盒 Bovine lipid peroxide,LPO ELISA kit 苊(標準品) Acenaphthene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC)
小鼠主動脈平滑肌細胞實驗牛核心蛋白聚糖(DCN)試劑盒 Bovine Decorin,DCN ELISA kit 鋁標準溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3) Aluminum solution 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3
牛壞死因子α(TNF-α)試劑盒 Bovine Tumor necrosis
factor α,TNF-α ELISA kit 鋁標準溶液(100μg/mL,基體:5%HCl) Aluminum solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體:5%HCl
小鼠小腸平滑肌細胞培養(yǎng) 規(guī)格5×105
小鼠結(jié)腸平滑肌細胞保存 規(guī)格5×105
小鼠食管上皮細胞實驗 規(guī)格5×105