細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品名稱 |
AD293:胚腎細胞說明書 |
規(guī)格 |
T25m2 |
貨號 |
BJ-X63341 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
鹽酸魯拉西酮 Lurasidone HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA檢測試劑盒rabbitNeuron-specificenolase,NSEELISAKit 96T/48T
鹽酸魯拉西酮(標準品) Lurasidone HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA檢測試劑盒rabbitneuroophin3,-3ELISAKit 96T/48T
櫻黃素(標準品) Prunetin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA檢測試劑盒rabbitneuroophin4,-4ELISAKit 96T/48T
香橙素(標準品) Aromadendrin(Dihydrokaempferol) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品 兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA檢測試劑盒Rabbitadrenomedullin,ADMELISAKit 96T/48T
3',4',7-三羥基黃酮(標準品) 3',4',7-Trihydroxyflavone 質(zhì)量規(guī)格:>97%,標準品 兔子生長釋放多肽(GHRP)ELISA檢測試劑盒RabbitGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISAKit 96T/48T
地克珠利 Diclazuril 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 兔子視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISA檢測試劑盒Rabbietinolbindingprotein4,RBP-4ELISAKit 96T/48T
美他環(huán)素,甲烯土霉素(標準品) Metacycline HCl;Methacycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 兔子瘦素(LEP)ELISA檢測試劑盒rabbitLeptin,LEPELISAKit 96T/48T
美他環(huán)素,甲烯土霉素鹽酸鹽 Metacycline HCl;Methacycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:potency>877U per mg 兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA檢測試劑盒Rabbitmyelinbasicprotein,MBPELISAKit 96T/48T
己二酸二 Adipic dihydrazide 質(zhì)量規(guī)格:>98% 兔子透明質(zhì)酸(HA)ELISA檢測試劑盒rabbitHyaluronicacid,HAELISAKit 96T/48T
alpha-亞麻酸(標準品) Linolenic acid 質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%(GC),分析標準品 兔子脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA檢測試劑盒rabbitDehydroepiandrosteronesulfate,DHEA-SELISAKit
96T/48T
兔子前列腺素E2(PGE2)ELISA檢測試劑盒rabbitProstaglandinE2,PG-E2
96T/48T 鈦黃;達旦黃;鈦鎳黃 Titan
yellow 質(zhì)量規(guī)格:BS
兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒Rabbitglialfibrillaryacidicprotein,GFAP 96T/48T 雙水楊酯;水楊酸-2-羧基苯酯 Sasapyrine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
兔子神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA檢測試劑盒rabbitNervegrowthfactor,NGF 96T/48T 雙水楊酯 ;水楊酸-2-羧基苯酯 Sasapyrine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA檢測試劑盒rabbitNeuron-specificenolase,NSE 96T/48T 鹽酸魯拉西酮 Lurasidone HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA檢測試劑盒rabbitneuroophin3,-3 96T/48T 鹽酸魯拉西酮(標準品) Lurasidone HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA檢測試劑盒rabbitneuroophin4,-4 96T/48T 櫻黃素(標準品) Prunetin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品
兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA檢測試劑盒Rabbitadrenomedullin,ADM 96T/48T 香橙素(標準品) Aromadendrin(Dihydrokaempferol) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品
兔子生長釋放多肽(GHRP)ELISA檢測試劑盒RabbitGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRP 96T/48T 3',4',7-三羥基黃酮(標準品) 3',4',7-Trihydroxyflavone 質(zhì)量規(guī)格:>97%,標準品
兔子視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISA檢測試劑盒Rabbietinolbindingprotein4,RBP-4 96T/48T 地克珠利 Diclazuril 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
兔子瘦素(LEP)ELISA檢測試劑盒rabbitLeptin,LEP 96T/48T 美他環(huán)素,甲烯土霉素(標準品) Metacycline HCl;Methacycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
AD293:胚腎細胞說明書大鼠成骨組織提取物【Bone: Normal Rat
Bone Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
大鼠小腦組織提取物【Brain: Normal Rat Cerebellar Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
大鼠腦膜組織提取物【Brain: Normal Rat Meningeal Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg