細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
HFL1:胚肺成纖維細(xì)胞保存 |
規(guī)格 |
T25m2 |
貨號(hào) |
BJ-X63307 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株;(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮細(xì)胞株,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
****(標(biāo)準(zhǔn)品) Etomidate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)試劑盒 Rat growth differeiation factor 15,GDF15 ELISA Kit
N-乙酰神經(jīng)氨酸/唾液酸 N-Acetyl Neuraminic Acid/NANA/Neu5Ac/SA 質(zhì)量規(guī)格:度≥98.0% 大鼠生長(zhǎng)(GH)試劑盒 Rat growth hormone,GH ELISA KIT
紅霉素 Erythromycin 質(zhì)量規(guī)格:≥850 μg/mg,BR 大鼠生長(zhǎng)釋放多肽(GHRP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISAKit 96T/48T
紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Erythromycin 質(zhì)量規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測(cè)定 大鼠生長(zhǎng)釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratgrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 96T/48T
鹽酸多巴酚丁胺 Dobutamine HCL 質(zhì)量規(guī)格:BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí),度大于99%,USP29 大鼠生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生長(zhǎng)刺激因子(GROα/CXCL1/MGSA)試劑盒 Rat growth-regulated oncogene α/melanoma growth stimulating activity,GROα /MGSA Elisa Kit
羥丙基β環(huán)糊精;2-羥丙基-β-環(huán)糊精 HPCD 質(zhì)量規(guī)格:>98%,藥用級(jí) 大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)ELISA檢測(cè)試劑盒RatSomatostatin,SSELISAKit 96T/48T
羧甲基殼聚糖 Carboxymethyl chitosan 質(zhì)量規(guī)格:羧基化度80%,粘度10mPa.s~80mpa.s(cps);氧羧甲基 大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)試劑盒 Rat Somatostatin,SS ELISA Kit
依諾肝素鈉 Enoxaparin 質(zhì)量規(guī)格:BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí);Anti-factor Xa activity(dried substance):90.0~125.0IU/mg;Anti-factor Ⅱa activity(dried substance) :20.0~35.0IU/mg。符合USP35標(biāo)準(zhǔn) 大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA檢測(cè)試劑盒Raetinolbindingprotein4,RBP-4ELISAKit 96T/48T
依諾肝素鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Enoxaparin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定 大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)試劑盒 Rat Retinol binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit
馬來酸曲美布?。?biāo)準(zhǔn)品) Trimebutine
maleate 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定 大鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)試劑盒 Rat cyclophilin
A,CyPA ELISA Kit
大鼠腎腫瘤抗原(RAGE)試劑盒 Rat renal tumor
aigen,RAGE ELISA kit **** Etomidate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
大鼠生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)試劑盒 Rat growth differeiation factor 15,GDF15 ELISA Kit ****(標(biāo)準(zhǔn)品) Etomidate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠生長(zhǎng)(GH)試劑盒 Rat growth hormone,GH ELISA KIT N-乙酰神經(jīng)氨酸/唾液酸 N-Acetyl Neuraminic Acid/NANA/Neu5Ac/SA 質(zhì)量規(guī)格:度≥98.0%
大鼠生長(zhǎng)釋放多肽(GHRP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRP 96T/48T 紅霉素 Erythromycin 質(zhì)量規(guī)格:≥850 μg/mg,BR
大鼠生長(zhǎng)釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratgrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin 96T/48T 紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Erythromycin 質(zhì)量規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測(cè)定
大鼠生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生長(zhǎng)刺激因子(GROα/CXCL1/MGSA)試劑盒 Rat growth-regulated oncogene α/melanoma growth stimulating activity,GROα /MGSA Elisa Kit 鹽酸多巴酚丁胺 Dobutamine HCL 質(zhì)量規(guī)格:BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí),度大于99%,USP29
大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)ELISA檢測(cè)試劑盒RatSomatostatin,SS 96T/48T 羥丙基β環(huán)糊精;2-羥丙基-β-環(huán)糊精 HPCD 質(zhì)量規(guī)格:>98%,藥用級(jí)
大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)試劑盒 Rat Somatostatin,SS ELISA Kit 羧甲基殼聚糖 Carboxymethyl chitosan 質(zhì)量規(guī)格:羧基化度80%,粘度10mPa.s~80mpa.s(cps);氧羧甲基
大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA檢測(cè)試劑盒Raetinolbindingprotein4,RBP-4 96T/48T 依諾肝素鈉 Enoxaparin 質(zhì)量規(guī)格:BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí);Anti-factor Xa activity(dried substance):90.0~125.0IU/mg;Anti-factor Ⅱa activity(dried substance) :20.0~35.0IU/mg。符合USP35標(biāo)準(zhǔn)
大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)試劑盒 Rat Retinol binding protein
4,RBP-4 ELISA Kit 依諾肝素鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Enoxaparin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
人腎動(dòng)脈組織提取物HFL1:胚肺成纖維細(xì)胞保存【Human Kidney :
Normal Renal Artery Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
人腎足突基底膜組織提取物【Human kidney: Normal kidney Foot Processes Basement MembraneDerivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
人膀胱組織提取物【Human Bladder :Normal Bladder Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg