細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品名稱 |
hFoB1.19:SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞實驗 |
規(guī)格 |
T25m2 |
貨號 |
BJ-X63272 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
抑霉唑(標準品) Imazalil 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛(EPI)試劑盒 Bovine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit
春雷霉素鹽酸鹽(標準品) Kasugamycin 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥90% (HPLC) 牛(NO)試劑盒 Bovine Niic Oxide,NO ELISA Kit
標準溶液(10μg/ml,u=4%) Kitazine solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4% 牛0酸甘油酸酯激酶2(PGK2)試劑盒 Bovine Phosphoglycerate kinase 2,PGK2 ELISA kit
利谷?。藴势罚?span> Linuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛0酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFKELISAKit 96T/48T
苯噻草胺(標準品) Mefenacet 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,98.5% 牛0酸果糖激酶(PFK)試劑盒 Bovine Phosphofructokinase,PFK ELISA Kit
甲磺隆標準溶液(10μg/ml,u=4%) Metsulfuron-methyl solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4% 牛0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)試劑盒 Bovine pAMPK ELISA Kit
甲霜靈(標準品) Metalaxyl 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,98% 牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)ELISA檢測試劑盒Bovinephosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCKELISAKit 96T/48T
甲氧?。藴势罚?span> Metoxuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)試劑盒 Bovine phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit
滅草隆(標準品) Monuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛1試劑盒 Bovine Coisone ELISA Kit
煙嘧磺?。藴势罚?span>
Nicosulfuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛ELISA試劑盒
內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA檢測試劑盒MonkeyEndothelin1,ET-1
96T/48T 異標準溶液(10μg/ml,u=6%) Iprobenfos
standard solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6%
牛(EPI)試劑盒 Bovine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit 抑霉唑(標準品) Imazalil 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛(NO)試劑盒 Bovine Niic Oxide,NO ELISA Kit 春雷霉素鹽酸鹽(標準品) Kasugamycin 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥90% (HPLC)
牛0酸甘油酸酯激酶2(PGK2)試劑盒 Bovine Phosphoglycerate kinase 2,PGK2 ELISA kit 標準溶液(10μg/ml,u=4%) Kitazine solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4%
牛0酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFK 96T/48T 利谷隆(標準品) Linuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛0酸果糖激酶(PFK)試劑盒 Bovine Phosphofructokinase,PFK ELISA Kit 苯噻草胺(標準品) Mefenacet 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,98.5%
牛0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)試劑盒 Bovine pAMPK ELISA Kit 甲磺隆標準溶液(10μg/ml,u=4%) Metsulfuron-methyl solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4%
牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)ELISA檢測試劑盒Bovinephosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCK 96T/48T 甲霜靈(標準品) Metalaxyl 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,98%
牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)試劑盒 Bovine phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit 甲氧?。藴势罚?span> Metoxuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
hFoB1.19:SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞實驗牛1試劑盒 Bovine Coisone ELISA Kit 滅草?。藴势罚?span> Monuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
大鼠支氣管成纖維細胞提取物【Rat Airway:
Normal Bronchial Fibroblast Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞提取物【Rat Lung: Normal Vein Endothelial Cell Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
大鼠氣管和支氣管上皮細胞提取物 【Rat Airway: Normal Bronchial and Tracheal Epithelial Cell Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg