科研抗體兩種標記法講解
日期：2024-11-24 09:27
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摘要：
科研抗體標記法如下：
1、直接標記法：
抗體的準備：取提純的Ig溶液測定蛋白質(zhì)含量，置于三角燒瓶中加入生理鹽水和0.5mol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液，冰槽中攪拌5~10min；
熒光素的準備：按每毫克蛋白質(zhì)加0.01~0.02mg的FITC計算，準確稱取后加入抗體溶液中；
標記：邊攪拌邊加入熒光素，避免粉末黏附于壁上，置于4℃冰箱或冰庫繼續(xù)攪拌12~18h；
透析：結(jié)合完畢后，先將結(jié)合物以3000r/min離心20min，除去少量沉淀物后裝入透析袋中再置于pH8.0緩...
科研抗體標記法如下：
1、直接標記法：
抗體的準備：取提純的Ig溶液測定蛋白質(zhì)含量，置于三角燒瓶中加入生理鹽水和0.5mol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液，冰槽中攪拌5~10min；
熒光素的準備：按每毫克蛋白質(zhì)加0.01~0.02mg的FITC計算，準確稱取后加入抗體溶液中；
標記：邊攪拌邊加入熒光素，避免粉末黏附于壁上，置于4℃冰箱或冰庫繼續(xù)攪拌12~18h；
透析：結(jié)合完畢后，先將結(jié)合物以3000r/min離心20min，除去少量沉淀物后裝入透析袋中再置于pH8.0緩沖鹽的燒杯中透析過夜；
過柱：取透析過夜的標記物，過葡聚糖凝膠G-25或G-50柱，分離游離的FITC，收集標記的熒光抗體進行鑒定。
2、間接標記法：
抗體的準備：0~4℃下，用0.01mol/L pH8.0 PBS將待標記的抗體蛋白溶液稀釋到濃度為30~40mg/ml，置于三角燒瓶內(nèi)放入冰槽中；
熒光素的準備：按每毫克蛋白質(zhì)加入0.01mg的熒光素稱取，溶解于等量的3%重碳酸鈉水溶液中；將抗體蛋白溶液與FITC溶液等量混合，在0~4℃中攪拌18~24h，充分攪勻；透析或過柱層析。