生化試劑實(shí)驗(yàn)步驟
日期：2024-11-25 01:55
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摘要：
生化試劑實(shí)驗(yàn)步驟：
1、貼壁細(xì)胞用胰酶消化，離心收集。
2、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊。
3、加入5mlDNA提取緩沖液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混勻。
4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,
5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，異戊醇）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相
6、用等體積的，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。
7、2500rpm離心...
生化試劑實(shí)驗(yàn)步驟：
1、貼壁細(xì)胞用胰酶消化，離心收集。
2、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊。
3、加入5mlDNA提取緩沖液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混勻。
4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,
5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，異戊醇）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相
6、用等體積的，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。
7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。
8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉（PH5.2）與2倍體積-20℃預(yù)冷無水乙醇。-20℃20min。
9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。