己糖激酶檢測試劑盒檢測原理
日期:2024-11-24 09:27
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摘要:
己糖激酶(Hexokinase)廣泛存在于動植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是糖酵解途徑中控制葡萄糖代謝速率的**個關鍵酶,可催化葡萄糖轉化為6-磷酸葡萄糖,在機體代謝過程中發(fā)揮著重要作用。
己糖激酶可催化葡萄糖和ATP**葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)和ADP,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)可催化葡萄糖-6-磷酸脫氫**6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同時使NADP+還原成NADPH,NADPH在340 nm處具有特征吸收峰,通過吸光值變化即可表征己糖激酶的活性。
己糖激酶檢測原理
測定過程中所需要的儀器和試劑:紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿(光徑=1 cm)/96孔UV板、研缽/勻漿器、可調式移液器/多道移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
1.粗酶液的制備(可根據預實驗結果適當調整樣本量和比例)
①**或細胞:離心收集**或細胞至離心管內,按照**或細胞數量(10個):提取液體積(mL)為(500-1000):1的比例(建議500萬**或細胞加入1 mL提取液)處理樣品,冰浴超聲破碎(功率20%或200 W,超聲3 s,間隔10 s,重復30次),4℃ 8000 g離心10 min,取上清置于冰上待測。
②組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:(5-10)的比例(建議稱取0.1 g組織,加入1 mL提取液)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 8000 g離心10 min,取上清置于冰上待測。
③血清(漿)、培養(yǎng)液等液體樣本:直接檢測或適當稀釋后再進行檢測。
己糖激酶可催化葡萄糖和ATP**葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)和ADP,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)可催化葡萄糖-6-磷酸脫氫**6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同時使NADP+還原成NADPH,NADPH在340 nm處具有特征吸收峰,通過吸光值變化即可表征己糖激酶的活性。
己糖激酶檢測原理
測定過程中所需要的儀器和試劑:紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿(光徑=1 cm)/96孔UV板、研缽/勻漿器、可調式移液器/多道移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
1.粗酶液的制備(可根據預實驗結果適當調整樣本量和比例)
①**或細胞:離心收集**或細胞至離心管內,按照**或細胞數量(10個):提取液體積(mL)為(500-1000):1的比例(建議500萬**或細胞加入1 mL提取液)處理樣品,冰浴超聲破碎(功率20%或200 W,超聲3 s,間隔10 s,重復30次),4℃ 8000 g離心10 min,取上清置于冰上待測。
②組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:(5-10)的比例(建議稱取0.1 g組織,加入1 mL提取液)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 8000 g離心10 min,取上清置于冰上待測。
③血清(漿)、培養(yǎng)液等液體樣本:直接檢測或適當稀釋后再進行檢測。