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PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)的基本原則
日期：2024-11-25 00:33
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摘要：
引物設(shè)計(jì)的基本原則：
1、 引物長度：15-30 bp，常用為20 bp左右。
2、 引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC 隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、 引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。
4、兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。
5、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
6、引物3‘端的堿基，特別是倒數(shù)第2個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)...
引物設(shè)計(jì)的基本原則：
1、 引物長度：15-30 bp，常用為20 bp左右。
2、 引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC 隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
1、 引物長度：15-30 bp，常用為20 bp左右。
2、 引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC 隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、 引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。
4、兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。
5、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
6、引物3‘端的堿基，特別是倒數(shù)第2個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，選擇是G和C。
7、 引物的5 ′端可以修飾。如附加限制酶位點(diǎn)，引入突變位點(diǎn)，用生物素、熒光物質(zhì)、地高辛標(biāo)記，加入其它短序列，包括起始密碼子、終止密碼子等。