流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)步驟
流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn):
1、制備細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)
2、分裝,按照每個(gè)EP(1.5ml)管1-2*10 6個(gè)細(xì)胞分裝,3500rpm,4度離心。
3、用100ulPBS重懸,加入10ul大鼠血清封閉,4度避光30min。
4、加入相應(yīng)的熒光標(biāo)記的抗體,混勻,避光,4度孵育30min。
5、加入1mlPBS洗兩遍。
6、用200ul PBS重懸,經(jīng)紗布過(guò)濾轉(zhuǎn)至流式管,上級(jí)檢測(cè)。
溫馨提示:細(xì)胞或者大小接近的顆粒物質(zhì)都可以檢測(cè)。
樣本通過(guò)鞘液的輸送,成單個(gè)隊(duì)列依次通過(guò)激光束。樣本事先可以根據(jù)檢測(cè)需要被熒光標(biāo)記,通過(guò)激光束的時(shí)候就會(huì)得到熒光信號(hào),被記錄下來(lái)??梢酝瑫r(shí)標(biāo)記不同的熒光標(biāo)記做不同的檢查。優(yōu)點(diǎn)就是可以在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)大量的樣本(每秒幾千個(gè)到幾萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)。
主要應(yīng)用于各種生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷。國(guó)際上通用的白細(xì)胞和淋ba瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)就是靠流式細(xì)胞儀的分型來(lái)確定的。