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RT-PCR技術(shù)檢測(cè)步驟
日期：2024-11-24 09:26
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摘要：RT-PCR技術(shù)檢測(cè)步驟
Real-time quantitative PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子產(chǎn)生，通過(guò)熒光信號(hào)不斷累積而實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR全程，然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。熒光定量PCR儀能夠監(jiān)測(cè)出熒光到達(dá)預(yù)先設(shè)定的閾值的循環(huán)數(shù)（Ct值）與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。
檢測(cè)流程檢測(cè)主要經(jīng)過(guò)取樣、留樣、保存、核酸提取、上機(jī)檢測(cè)等五個(gè)步驟：1、 取樣：用咽拭子擦拭咽后壁及雙側(cè)咽扁桃體處各5~10次，且不斷旋轉(zhuǎn)拭子；
2、 留樣：將拭子頭浸入細(xì)胞保存液中，折斷尾部后立即旋緊管蓋子，進(jìn)行留樣；
3、 保存：將樣品2~8℃保存，并及時(shí)送檢；
4、 核酸提?。簩缁畈《竞蟮臉颖具M(jìn)行核酸提取；用于后續(xù)檢測(cè)；
5、RT-PCR核酸檢測(cè)：將提取物進(jìn)行RT--PCR擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間約為70~80min。