注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
普氏立克次體熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015250 |
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
貂源細胞米格列奈鈣(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品Mitiglinide calcium Hydrate
MMP7 Others Human 人 MMP7 人細胞裂解液 (陽性對照) 丙基硫氧嘧啶 /6-正丙基-2-硫代尿嘧啶質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRPropylthiouracil
CM-R052大鼠平滑肌細胞完全培養(yǎng)基100mL環(huán)嗪酮(標準品)質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,98%Hexazinone
RSPO2 Others Human 人 FTLS / RSPO2 (186 Leu/Pro) 人細胞裂解液 (陽性對照) 氯吡嘧磺?。藴势罚┵|(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.5%Halosulfuron-methyl
小鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞完全培養(yǎng)基 100mL噻螨酮(標準品)質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.5% Hexythiazox
小鼠神經(jīng)皮質(zhì)細胞(MN-c)(1×106) LncaP, 人前列腺癌細胞 Human二氧化錫(> 99%,BR)質(zhì)量規(guī)格:> 99%,BRTin (IV) oxide
豚鼠胚胎細胞;104C1硫酸亞鈦(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTitanium (III) sulfate
FKBP7 Others Human 人 PPIase / FKBP7 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸鈦(>96%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>96%,BRTitanium (IV) sulfate
人前列腺成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL檸檬酸三丁酯(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTributyl
HaCaT細胞,人正常皮膚細胞 淋病柰瑟氏菌 小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);DG6-VAP33-GFP布地奈德-d8質(zhì)量規(guī)格:美國進口Budesonide-d8
普氏立克次體熒光PCR檢測試劑盒PRAP1
Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細胞裂解液 (陽性對照) potewwiumBIcaonaTE碳酸氫鉀試劑級白色結(jié)晶粉末RTsigma
人胚胎,皮膚,肌肉;M-7米氏酮 Michler's ketone,98% 90-94-8 25G 通用試劑
大鼠胰島β細胞瘤細胞;RIN-m5F 原位胰腺腺癌細胞,BxPC-3細胞 MM45T.Li細胞,鼠肝癌細胞系格拉司瓊相關(guān)物質(zhì)C Grcnisqtron Rqlctqd CoMpound C;N-[(1R,3r,5S)-9-czcbicyclo[3.3.1]non-3-yl]-1-Mqthyl-1H-indczolq-3-ccrboxcMidq xy7nochloridq 141136-01-8
T24, 人膀胱癌細胞 HumanGumcopal硬樹脂5克BR,99%
FCRL1 Others Human 人 FCRL1 / IFGP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 二;基二DietxylaMine;