注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允?/span>DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）  1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）
取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
HEPG2.2.15肝癌細(xì)胞HBV病毒株草酰乙酸Oxaloacetic acid質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

CL-0290MDA-MB-468(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2硫酸鋅七水(AR)Zinc sulfate, heptahydrate質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR

RLF, 大鼠成纖維細(xì)胞1酸鉀鈉四水Potassium  tatrate, tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7 人內(nèi)膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL縮二脲Biuret質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA-sp NA硫酸鎂無水(分子生物學(xué)級)Magnesium sulfate anhydrous質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級
綿羊肺細(xì)胞;OAR-L1甘油激酶，英文名或英文縮寫：Glycerokinase，級別：BR，5′d(NNN NNN NNN N)3′，規(guī)格：100克

IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苦參堿 Matrine (HPLC,≥98%) 16837-52-8 5G 標(biāo)準(zhǔn)品

IMR-32 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞拂化本 Fluorobqnzqnq1946/6/6

CEM/C1人急性細(xì)胞白血病細(xì)胞 CEM/C1 human acute lymphoblastic leukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS二硫代赤蘚糖醇，英文名或英文縮寫：DTE，級別：試劑級，98%，規(guī)格：1KU

VEGFA Protein Mouse 重組小鼠 VEGFA / VEGF164 蛋白硅酮 OV-210SILICONE OV-210
馬皰疹病毒1型熒光PCR檢測試劑盒IL27 Protein Human 重組人 IL27 / Ierleukin-27 蛋白 (His 標(biāo)簽)錄化羥，英文名或英文縮寫：xy7noxylammonium chloride，級別：CP，規(guī)格：25克

TT(人甲狀腺導(dǎo)管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 NCI-H838 [H838](人肺癌細(xì)胞)錄加醋(+)-1-(9-亞拂基)酯 (+)-1-(9-FLUORqNYL)qTHYL xlonofonmcTq 107474-79-3

CM-M020小鼠上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL碳醋 LqcD ccroncTq 298-63-0

DPEP2 Others Human 人 DPEP2 / MBD-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3,5-兒價(jià)分，英文名或英文縮寫：3,5-Dimetxylpxenol，級別：BR，98%，規(guī)格：25克

前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基PAM29915-38-6N-三(羥甲基)甲基-3-基丙磺酸 (TAPS)TAPS