抗體的制備過(guò)程:
1. M Y原:普通的大分子蛋白,通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為M Y原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有M Y原性的抗原,常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. M Y動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量**時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. M Y血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. M Y血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. M Y血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 |
Anti-SOAT1/ACAT1抗體 |
規(guī) 格 |
0.2ml/200μg |
貨號(hào) |
BJ-K95743 |
英文名稱 Anti-SOAT1/ACAT1
中文名稱 膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶1抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類(lèi)型 polyclonal
別 名 ACAT; ACAT-1; ACAT1; Acyl coenzyme A cholesterol acyltransferase 1; Acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1; Cholesterol acyltransferase 1; SOAT; SOAT1; SOAT 1; SOAT1_HUMAN; STAT; Sterol O acyltransferase 1; Sterol O-acyltransferase 1.
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit
產(chǎn)品類(lèi)型 一抗
研究領(lǐng)域 心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 61kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human SOAT1/ACAT1
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
對(duì)照/標(biāo)本無(wú)染色 產(chǎn)品僅用于科研
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入,是否孵育了足夠的時(shí)間。
③ 對(duì)照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測(cè)系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點(diǎn)是非常重要的。比如,如果一抗是兔來(lái)源的抗體,二抗一定要用抗兔的二抗來(lái)匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融,試劑保存時(shí)一定要避免與揮發(fā)性有機(jī)溶劑同放一室,以免降低抗體的效價(jià)。
⑥ 檢查標(biāo)本的儲(chǔ)存條件,好用已知陽(yáng)性的標(biāo)本來(lái)同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化,則可排除底物的因素。需要注意的是,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)用完,否則會(huì)失效。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,溶液的pH值很重要,與過(guò)氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉。
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配。
弱陽(yáng)性
如果陰性對(duì)照沒(méi)有染色而陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本弱陽(yáng)性,除了考慮上述因素外,還應(yīng)考慮:
① 標(biāo)本的固定方式,不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r(shí)溫度過(guò)高,都會(huì)影響到所檢測(cè)的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。
② 不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式,由于石蠟切片在制作的過(guò)程中固定劑對(duì)抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時(shí)使用的抗原雙暴露法,至于使用哪一種方法,應(yīng)參照**廠家的說(shuō)明,同時(shí)結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定。
③ 抗體的稀釋度是否過(guò)高或者孵育的溫度/時(shí)間是否正確。一般試劑**廠家都會(huì)對(duì)試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標(biāo)本來(lái)自各種組織,處理過(guò)程也不盡相同,所以應(yīng)參照使用范圍,對(duì)所使用的一抗進(jìn)行梯度測(cè)試,找出佳的使用濃度。
④ 切片上了過(guò)多的沖洗液,當(dāng)抗體加至切片上時(shí),等于人為地對(duì)抗體進(jìn)行了進(jìn)一步的稀釋。
⑤ 孵育時(shí)切片是否放置水平,否則會(huì)導(dǎo)致抗體流失。
如果陰性對(duì)照沒(méi)有反應(yīng),陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)良好,而標(biāo)本弱陽(yáng)性,則可能是由于陽(yáng)性對(duì)照不是同一種咨詢組織、或固定方式不同等原因所致。
Anti-SREBP-1/FITC 熒光素標(biāo)記膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
FAS (Apo-a1; CD95;)(抗原) 載脂蛋白-a1Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
蛋白酶活化受體4/前列腺細(xì)胞凋亡反應(yīng)蛋白4抗體 Anti-PAR4 0.1ml
SPINK1/SPINK3 英文名稱: 相關(guān)胰蛋白酶抑制劑1抗體 0.1ml
EXTL3 英文名稱: 多發(fā)性外生骨疣樣蛋白3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-NFKB p65(Ser529) 0酸化細(xì)胞核因子抗體 規(guī)格 0.1ml
FAS (Apo-a1; CD95;)(抗原) 載脂蛋白-a1Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-peripherin/FITC 熒光素標(biāo)記外周蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-rabbit IgG/Glod 金標(biāo)記羊抗兔IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體 Anti-Eukaryotic aspartyl protease 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.1ml
FOXO3A 英文名稱: 叉頭蛋白O3A抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Thr187) 0酸化轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶1 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Glod 金標(biāo)記羊抗兔IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
Anti-SOAT1/ACAT1抗體戊二 (50%) 100ml Anthraglycoside B 中文名:大黃素-8-O-葡萄糖苷 分子式:C21H20O10 度:97.5%
戊二 (25%) 100ml Anthraquinone 84-65-1 中文名:蒽醌 分子式:C14H8O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
五羥色胺 (Serotonin/5-HT) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 Anthraglycoside B 23313-21-5 中文名:大黃素-8-O-葡萄糖苷 分子式:C21H20O10 度:97.5% 關(guān)鍵詞:
無(wú)形體核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T Anthraflavic acid 84-60-6 中文名:二羥蒽醌 分子式:C14H8O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
無(wú)水碳酸鈣 100g Annonacin 111035-65-5 中文名: 分子式:C35H64O7 度:97.0% 關(guān)鍵詞: 細(xì)胞毒活性; 番荔枝屬; 哥納香屬; 木瓣樹(shù)屬; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)