抗體的制備過程:
1. M Y原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為M Y原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有M Y原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. M Y動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量**時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. M Y血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. M Y血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. M Y血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 |
Anti-SMURF2抗體 |
規(guī) 格 |
0.2ml/200μg |
貨號 |
BJ-K95524 |
英文名稱 Anti-SMURF2
中文名稱 Smad蛋白E3泛素連接酶2抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
別 名 hSMURF2; MGC138150; Smad specific E3 ubiquitin ligase 2; SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 2; Smad ubiquitination regulatory factor 2; Ubiquitin protein ligase SMURF2; DKFZp686F0270; MGC138150.
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Cow, Horse
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 學 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
蛋白分子量 predicted molecular weight: 82kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human SMURF2
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
對照/標本無染色 產(chǎn)品僅用于科研
① 確認是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認所有的試劑是否按正確的順序加入,是否孵育了足夠的時間。
③ 對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點是非常重要的。比如,如果一抗是兔來源的抗體,二抗一定要用抗兔的二抗來匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應(yīng)避免反復凍融,試劑保存時一定要避免與揮發(fā)性有機溶劑同放一室,以免降低抗體的效價。
⑥ 檢查標本的儲存條件,好用已知陽性的標本來同時做陽性對照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,簡單的檢測方法是將一滴標記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預期的顏色變化,則可排除底物的因素。需要注意的是,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時間內(nèi)用完,否則會失效。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,溶液的pH值很重要,與過氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉。
⑨ 檢查復染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配。
弱陽性
如果陰性對照沒有染色而陽性對照標本弱陽性,除了考慮上述因素外,還應(yīng)考慮:
① 標本的固定方式,不當?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r溫度過高,都會影響到所檢測的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。
② 不適當?shù)目乖迯头绞?,由于石蠟切片在制作的過程中固定劑對抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復或酶消化或兩種同時使用的抗原雙暴露法,至于使用哪一種方法,應(yīng)參照**廠家的說明,同時結(jié)合標本的具體情況而定。
③ 抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時間是否正確。一般試劑**廠家都會對試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標本來自各種組織,處理過程也不盡相同,所以應(yīng)參照使用范圍,對所使用的一抗進行梯度測試,找出佳的使用濃度。
④ 切片上了過多的沖洗液,當抗體加至切片上時,等于人為地對抗體進行了進一步的稀釋。
⑤ 孵育時切片是否放置水平,否則會導致抗體流失。
如果陰性對照沒有反應(yīng),陽性對照反應(yīng)良好,而標本弱陽性,則可能是由于陽性對照不是同一種咨詢組織、或固定方式不同等原因所致。
Anti-TERT/FITC 熒光素標記端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白SLC24A5抗體 Anti-SLC24A5 0.1ml
SMC4 英文名稱: 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白4抗體 0.2ml
eIF4EBP1 英文名稱: eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-MBP(Tyr203) 0酸化髓鞘堿性蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-Socs 3/FITC 熒光素標記細胞因子信號傳導抑制蛋白3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
phospho-CREB-1 0酸化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg
食欲素受體抗體 Anti-OXR 1ml
SERPINB3 英文名稱: 絲酸蛋白酶抑制劑B3抗體 0.2ml
phospho-EGFR (Tyr1125) 英文名稱: 0酸化表皮生長因子受體抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-NMDAR1(Ser896) 0酸化谷氨酸受體1抗體 規(guī)格 0.1ml
phospho-CREB-1 0酸化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg
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