抗體的制備過程:
1. M Y原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為M Y原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有M Y原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. M Y動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量**時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. M Y血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. M Y血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. M Y血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 |
Anti-V-ATPase A1抗體 |
規(guī) 格 |
0.2ml/200μg |
貨號 |
BJ-K95323 |
英文名稱 Anti-V-ATPase A1
中文名稱 氫離子轉(zhuǎn)運ATP合成酶A1抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
別 名 V ATPase; V ATPase A; V ATPase A1; Vacuolar proton ATPase a1; V-type proton ATPase 95 kDa subunit a isoform 1; V-ATPase 95 kDa isoform a1; AltName: Full=Vacuolar proton pump subunit a1; Vacuolar proton translocating ATPase 95 kDa subunit a isoform 1; VPP1_HUMAN.
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 細胞生物 激酶和磷酸酶 通道蛋白 細胞膜受體 轉(zhuǎn)運蛋白
蛋白分子量 predicted molecular weight: 96kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human V-ATPase A1 (1-100aa)
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
對照/標本無染色 產(chǎn)品僅用于科研
① 確認是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認所有的試劑是否按正確的順序加入,是否孵育了足夠的時間。
③ 對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點是非常重要的。比如,如果一抗是兔來源的抗體,二抗一定要用抗兔的二抗來匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融,試劑保存時一定要避免與揮發(fā)性有機溶劑同放一室,以免降低抗體的效價。
⑥ 檢查標本的儲存條件,好用已知陽性的標本來同時做陽性對照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,簡單的檢測方法是將一滴標記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化,則可排除底物的因素。需要注意的是,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時間內(nèi)用完,否則會失效。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,溶液的pH值很重要,與過氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉。
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配。
弱陽性
如果陰性對照沒有染色而陽性對照標本弱陽性,除了考慮上述因素外,還應(yīng)考慮:
① 標本的固定方式,不當?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r溫度過高,都會影響到所檢測的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。
② 不適當?shù)目乖迯?fù)方式,由于石蠟切片在制作的過程中固定劑對抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時使用的抗原雙暴露法,至于使用哪一種方法,應(yīng)參照**廠家的說明,同時結(jié)合標本的具體情況而定。
③ 抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時間是否正確。一般試劑**廠家都會對試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標本來自各種組織,處理過程也不盡相同,所以應(yīng)參照使用范圍,對所使用的一抗進行梯度測試,找出佳的使用濃度。
④ 切片上了過多的沖洗液,當抗體加至切片上時,等于人為地對抗體進行了進一步的稀釋。
⑤ 孵育時切片是否放置水平,否則會導(dǎo)致抗體流失。
如果陰性對照沒有反應(yīng),陽性對照反應(yīng)良好,而標本弱陽性,則可能是由于陽性對照不是同一種咨詢組織、或固定方式不同等原因所致。
Lp- Alpha (Rabbit lipoprotein Alpha) ELISA Kit 兔脂蛋白αMulti-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-CYP8A1/PTGIS/FITC 熒光素標記前列環(huán)素合成酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cytokeratin 3+12 細胞角蛋白3+12抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit anti-HRP whole serum 兔抗HRP抗血清 0.5ml
Ceramide synthase 2 英文名稱: 轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ZNF307 鋅指蛋白307抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-CYP8A1/PTGIS/FITC 熒光素標記前列環(huán)素合成酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-TRF/Gold 金離子標記抗轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.5ml(15nm)
rhEGF(rh-Epidermal growth factor) 重組人表皮生長因子Multi-class antibodies規(guī)格: 100ug
β-抑制蛋白2抗體 Anti-β-arrestin 2 0.1ml
ZNF93 英文名稱: 鋅指蛋白93抗體 0.2ml
DNAH9 英文名稱: 軸絲動力蛋白重鏈9抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-eIF4EBP1(Thr36) 0酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
rhEGF(rh-Epidermal growth factor) 重組人表皮生長因子Multi-class antibodies規(guī)格: 100ug
Anti-V-ATPase A1抗體血液基因組DNA中量提取試劑盒(離心柱型) Blood genomic DNA Exaction Kit (cenifugal column type) Periplocoside F 中文名: 分子式:C63H104O23 度:98.0%
血液基因組DNA大量提取試劑盒(離心柱型) Blood genomic DNA Exaction Kit (cenifugal column type) Periplocoside F 中文名: 分子式:C63H104O23
血液RNA試劑盒 50T Periplocogenin 112899-63-5 中文名: 分子式:C28H42O6 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
血液DNA提取試劑盒(溶液型) 10ml(血量) Tranexamic acid 1197-18-8 中文名:凝血酸 分子式:C8H15NO2 度:98.0%
血液DNA大量提取試劑盒 5T Periplocogenin 中文名: 分子式:C28H42O6 度:98.0%