細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
商品屬性：
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產(chǎn)品名稱 |
生長(zhǎng)特性 |
貨號(hào) |
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PA317；小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 |
貼壁生長(zhǎng) |
BJ-01X85431 |
細(xì)胞名稱 PA317；小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 PA317細(xì)胞株源自TK- NIH/3T3細(xì)胞，通過(guò)pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過(guò)感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞，**可以感染許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。這株細(xì)胞**的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴梭w?？赡芤?yàn)檗D(zhuǎn)入DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。在含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C17
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
細(xì)胞STR鑒定服務(wù)流程：
HUVEC, 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞DAPT (GSI-IX)DAPT (GSI-IX)質(zhì)量規(guī)格：>98%,γ-secretase抑制劑
MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元 MSU-1細(xì)胞 Ha Fe(羊膜細(xì)胞)XAV-939;NVP-XAV
939XAV939質(zhì)量規(guī)格：>98%
急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞;TALL-104胡黃連苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）Picroside I質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
F3 Others Mouse 小鼠 F3 / Tissue factor / CD142 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 胡黃連苷 II(標(biāo)準(zhǔn)品)Picroside II質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細(xì)胞;OCM-1A胡黃連苷 III（標(biāo)準(zhǔn)品）Picroside III質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品rU亞磷酰胺單體 rU Phosphoramidite 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 英文名稱RatVitaminB6ELISAKit大鼠維生素B6(VB6)規(guī)格：96T/48T
Bz-rA亞磷酰胺單體 Bz-rA
Phosphoramidite 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 烘賠食品乙酸激酶法定量檢測(cè)試劑盒20
i-bu-rG亞磷酰胺單體 i-bu-rG
Phosphoramidite 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitHb-AGE人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物規(guī)格：48T/96T
PF299804（EGFR抑制劑）
Dacomitinib 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒 ，英文名： MC Ab ELISA Kit
Ac-rC亞磷酰胺單體 Ac-rC
Phosphoramidite 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratmelanocyteaibody,MCAbELISAKit 96T/48T
素(含檸檬酸鹽緩沖液) Tetrodotoxin 質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分 人波形蛋白(VIM)試劑盒 Human vimein ELISA Kit
素粉
Tetrodotoxin 質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分 Rati-iodothyronine,T3ELISAKit大鼠狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
AC-DC亞磷酰胺單體 Ac-dC
Phosphoramidite 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR MHPG高效液相色譜電化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒20
2,2'-脫水-5-甲基尿苷 2,2'-Anhydro-5-Me-U 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR
PorcineEpinephrine/Adrenaline,EPIELISA試劑盒豬(EPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
7-DEAZA-7--2'-脫氧鳥苷 7-Deaza-7-I-2’-dG 質(zhì)量規(guī)格：>97% 小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)ELISA 試劑盒人生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 別稱:GDF-15, MIC-1, MIC1, NAG-1, PDF, PLAB, PTGFB, TGF-PL Human GDF15(Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測(cè)Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組GDF15濃度
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞產(chǎn)品僅用于科研
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
PA317；小鼠胚胎成纖維細(xì)胞采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。