注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱： 副溶血性弧菌(VP)核酸試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

英文名稱:  詳見(jiàn)說(shuō)明
產(chǎn)品貨號(hào)： BJ-R014967

產(chǎn)品規(guī)格： 50T

產(chǎn)品分類： 熒光-PCR法

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)，無(wú)非特異性擴(kuò)增；

◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；

◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

      引物1（10pM）               2μl

      引物2（10PM）              2μl

      Taq酶（2U/μl）            1μl

      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

     加ddH2O至               50 μl

     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

使用方法：

注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書；陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取，可直接使用。

2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）

取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。

副溶血性弧菌(VP)核酸試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。

兔子組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2,2-Bis(3-amino-4-hydroxyphenyl)hexafluoropropane  中文名：2,2-雙(3-氨基-4-羥苯基)六氟丙烷  分子式：C15H12F6N2O2  度：98.0%

兔子組織多肽抗原elisa試劑盒   兔子組織多肽抗原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子組織多肽抗原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子組織多肽抗原試劑盒、兔子組織多肽抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Aloe-emodin  中文名：蘆薈大黃素  分子式：C15H10O5  度：98.0%

兔子組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒              Allopurinol  中文名：別嘌醇  分子式：C5H4N4O 

兔子組織多肽抗原(TPA)ELISAKit     Albendazole  54965-21-8  中文名：阿苯達(dá)唑  分子式：C12H15N3O2S  度：98.5%  關(guān)鍵詞： 

兔子組織多肽抗原(TPA)ELISAKit                 9-Oxooctadeca-10,12-dienoic acid  中文名：  分子式：C18H30O3

5-甲基吲哚(>98%,BR)  5-Methylindole  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitCathAb人組織蛋白酶抗體規(guī)格：48T/96T

5-硝基愈創(chuàng)木酚(植物級(jí))  5-Nitroguaiacol  質(zhì)量規(guī)格：>98%,植物級(jí) 小鼠尼克酰胺-N-甲基轉(zhuǎn)移酶(NNMT)ELISA試劑盒 ，英文名： NNMT ELISA Kit

6--2-萘酚(>98%,BR)  6-Bromo-2-naphthol  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人β羥(β-OHB)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 96T/48T

6-(γ,γ-二甲基烯丙基氨基)嘌呤核苷(植物級(jí))  6-Dimethylallylamino purine riboside  質(zhì)量規(guī)格：>98%,植物級(jí) 大鼠抑胃肽(GIP)試劑盒 Rat gasic inhibitory polypeptide,Gip ELISA kit

6-甲基(>98%，BR)  6-Methylcoumarin  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 英文名稱HumanCCL20ELISAKit人CCL20規(guī)格：96T/48T

7-氨基頭孢烷酸  7-Aminocephalosporanic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 非同位素AP-BCIP/NBT法DNA南方雜交試劑盒5

8-羥基喹哪啶(>98%,BR)  8-Hydroxyquinaldine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitcath-K人組織蛋白酶K規(guī)格：48T/96T

9,10-二蒽(>98%,BR)  9,10-Dibromoanthracene  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒 ，英文名： ADRA1A ELISA Kit

雙酚芴(>98%,BR)  9,9-Bis(4-hydroxyphenyl) fluorine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein4,IGFBP-4ELISAkit 96T/48T

酸性藍(lán)29(>50%，Ind Grade)  Acid blue 29  質(zhì)量規(guī)格：>50%，Ind Grade 人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(c-MET/HGFR)試劑盒 Human HGFR ELISA Kit

凋亡相關(guān)因子配體   英文名稱：   apoptosis-inducing factor ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Fas-L  Venlaine  93413-69-5  中文名：文拉法辛  分子式：C17H27NO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

凋亡相關(guān)因子配體   英文名稱：   apoptosis-inducing factor ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Fas-L  Venlaine  93413-69-5  中文名：文拉法辛  分子式：C17H27NO2 

凋亡相關(guān)因子配體   英文名稱：   apoptosis-inducing factor Fas Ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Fas Ligand  Cleroindicin B  中文名：  分子式：C8H14O3  度：96.0%

凋亡相關(guān)因子Fas/Apo-1   英文名稱：   apoptosis-inducing factor Fas/Apo-1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Fas/Apo-1  Venlaine  中文名：文拉法辛  分子式：C17H27NO2 

凋亡相關(guān)因子 (Fas/Apo-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Varenicline tartrate  中文名：酒石酸伐侖克林  分子式：C17H19N3O6