注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格：
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產(chǎn)品名稱 |
木瓜PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟 |
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英文名稱 |
詳見說明 |
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貨號(hào) |
BJ-R014583 |
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法：
注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）
取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
木瓜PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
小鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISAKit L-Aspartic acid 中文名：L-天門冬氨酸 分子式：C4H7NO4 度：98.0%
小鼠酸性粒細(xì)胞趨化因子elisa試劑盒 小鼠酸性粒細(xì)胞趨化因子試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 小鼠酸性粒細(xì)胞趨化因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠酸性粒細(xì)胞趨化因子試劑盒、小鼠酸性粒細(xì)胞趨化因子eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月。
Lamivudine 中文名：拉米夫定 分子式：3O3S 度：98.0%
小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒
Lapatinib 中文名：拉帕替尼 分子式：C29H26ClFN4O4S
小鼠酸性成纖維生長(zhǎng)因子(mouse a-FGF) 作用： ELISA 規(guī)格：
48T/96T 進(jìn)口分裝
Lafutidine 中文名：拉呋替丁 分子式：C22H29N3O4S 度：98.0%
小鼠酸性成纖維生長(zhǎng)因子 英文名稱： acid fibroblast growth factor 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： a-FGF Cleroindicin B 中文名： 分子式：C8H14O3
大葉鳳尾蕨甙C HPLC≥98% 5mg 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒 ，英文名： VEGF-B ELISA Kit
丹參酮IIB HPLC≥97% 5mg 小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit
96T/48T
丹參新醌甲 HPLC≥98% 5mg 人肌紅蛋白(MYO/MB)試劑盒 Human Myoglobin ELISA Kit
丹寧卡 HPLC≥98% 5mg
RatcoagulationfactorⅩⅢ,FⅩⅢELISAKit大鼠凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
當(dāng)歸堿 HPLC≥98% 5mg 10倍0酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液500毫升
燈臺(tái)樹堿 HPLC≥98% 5mg
MouseCompleme3,C3ELISA試劑盒小鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
等效beta,二羥基異貝殼杉烷酸 HPLC≥98% 5mg 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA 試劑盒
等效,二羥基氧代貝殼杉烯酸 HPLC≥98% 5mg Rat calmodulin (CAM) ELISA Kit 大鼠鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒
等效羥基氧代異貝殼杉烷酸 HPLC≥98% 5mg
Humanverylateappearingaigen,VLAELISAKit 人遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
地黃苷 HPLC≥98% 5mg C3ELISA試劑盒鮭魚補(bǔ)體蛋白3規(guī)格：96T/48T
異甘草苷 Isoliquiritin (≥98%,HPLC) 5041-81-6 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品
人參Panax ginseng C.A.Mey 20(S)-人參皂苷CK 39262-14-1 C36H61O8 ≥98% 可拉明;泥可剎米(N0800000
Oleanolic acid齊墩果酸
Dexy7nocholic Acid去氫膽酸標(biāo)準(zhǔn)品81-23-2200mg
短柄烏頭 Aconitum brachypodum Diels Bullatine G 一枝蒿庚素 509-24-0 C22H31NO3 ≥98%