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產品詳情
  • 產品名稱:馬特定基因序列PCR檢測試劑盒原理

  • 產品型號:BJ-R014572
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簡單介紹:
馬特定基因序列PCR檢測試劑盒原理可以檢測組織、細胞、血液等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況。
詳情介紹:

注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。產品僅用于科研

參數規(guī)格:

產品名稱

馬特定基因序列PCR檢測試劑盒原理

英文名稱

詳見說明

貨號

BJ-R014572

產品運輸:低溫運輸

產品保存:-20℃保存

產品有效期:一年

產品特點:本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。

產品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。


實驗過程:

一、試劑準備

1. DNA模板

2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

二、操作步驟

1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

      引物1(10pM)               2μl

      引物2(10PM)              2μl

      Taq酶(2U/μl)            1μl

      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl

     加ddH2O至               50 μl

     視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。

3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法:

注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數秒后使用。

1. 樣本處理(樣本處理區(qū))

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。

2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))

取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。

馬特定基因序列PCR檢測試劑盒原理組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區(qū)。

2.加樣(樣本處理區(qū))

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區(qū)。

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