冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品描述：公司科技提供的原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司科技售后服務標準。

保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

人淀粉狀蛋白β(A4)前體蛋白結合家族B成員1(FE65)試劑盒 Human FE65 ELISA kit 3',3'',5',5''-四酚酞乙酯(80%,用于顯微鏡)  3',3'',5',5''-Tetrabromophenolphthaleinethyl ester  質(zhì)量規(guī)格：80%,用于顯微鏡

RatNeuroglobin,NGBELISAKit大鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 二甲基亞砜(AR,>99%(GC))   Dimethyl sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：AR,>99%(GC)

EDTA二血液抗凝液100毫升 二甲基亞砜(>99.8%(GC))   Dimethyl sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：>99.8%(GC)

MousePulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISA試劑盒小鼠肺表面活性物質(zhì)相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 二甲基亞砜(分子生物學,≥99.9%)   Dimethyl sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：分子生物學,≥99.9%

小鼠0酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)ELISA試劑盒 ，英文名： p-ERK ELISA Kit 二甲基亞砜(多肽合成)   Dimethyl sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：多肽合成

大鼠血管舒緩激肽(BK)ELISA檢測試劑盒Ratbradykinin,BKELISAKit 96T/48T 二甲基亞砜(藥用級)   Dimethyl sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：藥用級

人電子轉運黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉運黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)試劑盒 Human ETFDH ELISA kit 2,2′-雙雙苯(98.0%)  2,2′-Dibromobiphenyl  質(zhì)量規(guī)格：0.98

RatNeuron-specificenolase,NSEELISAKit大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 2,4,5,6-四氨基嘧啶硫酸鹽(≥98.0%)  2,4,5,6-Tetraaminopyrimidine sulfate salt  質(zhì)量規(guī)格：≥98.0%

EDTA血液抗凝液100毫升 煙酸甲酯(99%)  Methyl nicotinate  質(zhì)量規(guī)格：0.99

Mousepyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISA試劑盒小鼠交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T N-甲基-N-(基硅基)乙酰胺(97%)  N-Methyl-N-(trimethylsilyl)acetamide  質(zhì)量規(guī)格：0.97
1967/3/8  Thiamine (hydrochloride)  100g  Minute of Mice(MVM)小鼠微小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負20度

1967/3/8  Thiamine (hydrochloride)  250g  Minute of Mice(MVM)小鼠微小病毒PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負20度

1967/3/8  Thiamine (hydrochloride)  500g  Mouse Parvovirus(MPV)小鼠細小病毒LAMP試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負20度

1967/3/8  Thiamine (hydrochloride)  50g  Diffusely Adherent E.coli(DAEC)彌散黏附性大腸桿菌（大腸埃希菌）PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負20度

1967/3/8  Thiamine HCl (Vitamin B1)  10mM(in1mLDMSO)  Minute of Mice(MVM)小鼠微小病毒LAMP試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）  50次  低溫  負20度
L2:大鼠肺泡上皮細胞實驗 規(guī)格T25m2

L6：大鼠成肌細胞(分化）說明書 規(guī)格T25m2

L929:小鼠成纖維細胞培養(yǎng) 規(guī)格T25m2
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后RPMI8226細胞，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。