服務(wù)描述:
公司提供委托細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù),細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng);3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
ZJU-0430 細(xì)胞 |
規(guī)格 |
詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
貨號(hào) |
BJ-99371 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml) Butachlor solution 質(zhì)量規(guī)格:0.100mg/ml 犬KI-67抗原(MKI67)試劑盒 Dog aigen
KI-67,MKI67 ELISA kit
丁草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Butachlor 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,95% 犬N端前腦素(-proBNP)試劑盒 Canine N-terminal pro-brain naiuretic peptide,-proBNP ELISA Kit
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%) Butachlor solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4% 犬N端前心肽(-ProANP)試劑盒 Dog N-terminal Pro aial naiuretic peptide,-ProANP ELISA kit
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%) Butachlor solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=7% 犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 Canine N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit
炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品) Buturon 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬P物質(zhì)受體(TACR1)試劑盒 Dog Substance-P receptor,TACR1 ELISA kit
螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%) Bromopropylate solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=2% 犬P選擇素(SELP)試劑盒 Dog P-selectin,SELP ELISA kit
螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%) Bromopropylate solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2% 犬S100B蛋白(S100B)試劑盒 Dog S100 calcium binding protein B,S100B ELISA kit
硝醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Bronopol 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)試劑盒 Canine S100 calcium binding protein A12/Calgranulin-C,S100A12 ELISA Kit
氟草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Benfluralin 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α-1/2干擾素(IFN-α1/2)試劑盒 Canine Ierferon alpha-1/2 ELISA kit
苯并(k)熒蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)
Benzo(k)fluoranthene 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α1微球蛋白(α1-MG)試劑盒 Canine α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit
體直腸癌組織提取物【Cancer: Human
Rectum Cancer Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
體脂肪組織提取物【Fat: Normal Human Adipose Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
體胃癌組織源細(xì)胞提取物【Human Cancer: Gastric Cancer Tissues Cells Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
1174018-99-5
Relebactam 50mg Besnoitia besnoiti貝氏貝諾孢子蟲(chóng)探針?lè)晒舛?span>PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒
1174018-99-5 Relebactam 5mg Porcine Hemagglultinating Encephalomyelitis Virus(PHEV)豬血凝性腦脊髓炎病毒探針?lè)晒舛?span>RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒
1174043-16-3 AZD2461 100mg Piscirickettsia salmonis鮭魚(yú)立克次氏體探針?lè)晒舛?span>PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒
1174043-16-3 AZD2461 10mg Turkey Hemorrhagic Enteritis Virus(TuHEV)火雞出血性腸炎病毒探針?lè)晒舛?span>PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒
1174043-16-3
AZD2461 10mM(in1mLDMSO) Turkey Hemorrhagic Enteritis Virus(TuHEV)火雞出血性腸炎病毒探針?lè)晒舛?span>PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.ZJU-0430 細(xì)胞用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。