冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

大鼠膀胱成纖維細胞提取物【Rat Bladder：Normal Bladder Derivatives】

大鼠膀胱成纖維細胞提取物是從大鼠原代膀胱成纖維細胞提取的，大鼠原代膀胱成纖維細胞從正常大鼠膀胱組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

產品描述：公司科技提供的原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統和調節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司科技售后服務標準。

保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

CEACAM5 Others Human  CEACAM5 / CD66e 細胞裂解液 (陽性對照) 2,2'-雙(羥甲基)二苯(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)2,2'-Bis(hydroxymethyl)diphenyl Ether

外根殼細胞RNAHHORSC miRNA5 μg雙(2-甲酰苯基)(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)Bis(2-formylphenyl) Ether

CFHR2 Others Human  CFHR2 / FHR2 / HFL3 細胞裂解液 (陽性對照) 1,3-雙(4-氨苯氧基)苯(>98.0%(GC)(T))質量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)1,3-Bis(4-aminophenoxy)benzene

臍靜脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL4-氨基-4'-氯二苯(>97.0%(GC)(T))質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)4-Amino-4'-chlorodiphenyl Ether

BRL大鼠Buffalo細胞，大鼠肝細胞 SH-SY5Y(神經母細胞瘤細胞) 肺粘液上皮樣癌細胞;NCI-H2921,4,8,12-四氮雜環(huán)十五烷(>97.0%(T))質量規(guī)格：>97.0%(T)1,4,8,12-Tetraazacyclopentadecane
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-1A3酚酞單嶙酸二環(huán)己鹽，英文名或英文縮寫：pxenolphthalein monophosphate bis(cyclohexylammonium) salt，級別：試劑級，95%，規(guī)格：500毫克

TNFSF8 Others Rat 大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 細胞裂解液 (陽性對照) 鄰基隊本二酚 2-Mqthylxy7noinoneonq 92-71-6

膀胱平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)嗜熱菌蛋白酶，英文名或英文縮寫：Thermolysin from Bacillus thermoproteolyticus rokko，級別：生物技術級，30u/mg，規(guī)格：25克

EC-304細胞，血管內皮細胞 小鼠腎癌細胞,Kert-3細胞 脈絡叢上皮細胞總RNAHCPEpiC NA對羥基，英文名或英文縮寫：PHBA，級別：BR，99%，分子量600，液體，規(guī)格：5克

QG-56(肺扁平上皮癌細胞) 5×106cells/瓶×281-30-11,4,5,8-四二酐1,4,5,8-tetracarboxylic dianhydride
HCT 116細胞，結腸癌細胞 肝癌細胞,Bel-7404細胞 CL-0016A549(非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2外消旋5-羧基托特羅定rac 5-Carboxy Tolterodine質量規(guī)格：美國進口

二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr-R-(+)-托特羅定R-(+)-Tolterodine質量規(guī)格：美國進口

CSF1R Others Human  M-CSFR 細胞裂解液 (陽性對照) (R)-5-羥甲基托特羅定(R)-5-Hydroxymethyl Tolterodine質量規(guī)格：美國進口

小梁網細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)托吡酯-d12Topiramate-d12質量規(guī)格：美國進口

MZB1 Others Human  MZB1 / PERP1 細胞裂解液 (陽性對照) 2,3-去亞異丙基托吡酯2,3-Desisopropylidene Topiramate質量規(guī)格：美國進口
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.大鼠膀胱成纖維細胞提取物研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。