冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品描述：公司科技提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

三鈣(>98%,BR)  Calcium phosphate, tribasic  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 動物組織β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒20

DL-硒代蛋氨酸(USP)  DL-Selenomine  質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),USP 動物組織冰凍切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIANBLUE)染色試劑盒50

蜜二糖  Melibiose  質(zhì)量規(guī)格：>98%,水合物 動物組織超氧化物歧化酶(SOD)亞型制備試劑盒50

草酸鈉(>98%，BC)   oxalate  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC 動物組織鈣ATP酶(Ca++-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20

鎢酸鈉二水(>98%,BR)   tungstate, dehydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  動物組織鈣鎂ATP酶(Ca++/Mg++-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20

丁二酸酐(>98%,BR)  Succinic anhydride  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 動物組織高內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10

吐溫60  Tween-60  質(zhì)量規(guī)格：BR 動物組織高質(zhì)化肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10

酵母多糖 A(>98% (HPLC),BC)  Zymosan A from Saccharomyces cerevisiae  質(zhì)量規(guī)格：>98% (HPLC),BC 動物組織活性肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10

硫酸鈣(>99%,BR)  Calcium sulfate, anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 動物組織活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10

二環(huán)己基碳二亞胺(>99%,BR)  DCC, Dicyclohexylcarbodiimide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 動物組織肌質(zhì)網(wǎng)粗提分離試劑盒10
動物組織β-半乳糖苷酶活性超敏熒光定量檢測試劑盒20 乙酸鈣一水(>98%,BR)  Calcium acetate, monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

動物組織β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒20 三鈣(>98%,BR)  Calcium phosphate, tribasic  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

動物組織冰凍切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIANBLUE)染色試劑盒50 DL-硒代蛋氨酸(USP)  DL-Selenomine  質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),USP

動物組織超氧化物歧化酶(SOD)亞型制備試劑盒50 蜜二糖  Melibiose  質(zhì)量規(guī)格：>98%,水合物

動物組織鈣ATP酶(Ca++-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20 草酸鈉(>98%，BC)   oxalate  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC

動物組織鈣鎂ATP酶(Ca++/Mg++-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20 鎢酸鈉二水(>98%,BR)   tungstate, dehydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

動物組織高內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10 丁二酸酐(>98%,BR)  Succinic anhydride  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

動物組織高質(zhì)化肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10 吐溫60  Tween-60  質(zhì)量規(guī)格：BR

動物組織活性肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10 酵母多糖 A(>98% (HPLC),BC)  Zymosan A from Saccharomyces cerevisiae  質(zhì)量規(guī)格：>98% (HPLC),BC

動物組織活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10 硫酸鈣(>99%,BR)  Calcium sulfate, anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
PrimaCell?人肝星狀細(xì)胞試劑盒保存 規(guī)格6次/盒

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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
PrimaCell?小鼠腸巨噬細(xì)胞試劑盒實驗4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。