冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：客戶(hù)可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng)；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

保存和應(yīng)用：客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

四雙酚A雙(2-羥乙基)醚(>93.0%(GC))  Tetrabromobisphenol A Bis(2-hydroxyethyl) Ether  質(zhì)量規(guī)格：>93.0%(GC) 英文名稱(chēng)HumanAEA(IgG,M)ELISAKit人抗內(nèi)膜抗體(AEA)規(guī)格：96T/48T

4,4'-(六氟異亞丙基)二酞酸酐(>98.0%(GC)(T))  4,4'-(Hexafluoroisopropylidene)diphthalic Anhydride  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) 英文名稱(chēng)HumanAGRPELISAKit人Agoi相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T))  3,3',4,4'-Benzophenonetetracarboxylic Dianhydride  質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(T) 英文名稱(chēng)HumanaicardiacmuscleaibodyELISAKit人抗心肌抗體(CMA)規(guī)格：96T/48T

三環(huán)[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(>98.0%(GC))  Tricyclo[6.4.0.02,7]dodecane-1,8:2,7-tetracarboxylic Dianhydride  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱(chēng)HumanAIL(h)ELISAKIT人AIL規(guī)格：96T/48T

ε-己內(nèi)酯(>99.0%(GC))  ε-Caprolactone  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC) 英文名稱(chēng)HumanAILR1(h)ELISAKIT人AILR1規(guī)格：96T/48T

β-丙內(nèi)酯(>95.0%(GC)(T))  β-Propiolactone  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)(T) 英文名稱(chēng)HumanAILR2(h)ELISAKIT人血小板**素(TPO)規(guī)格：96T/48T

DL-丙交酯(>98.0%(T))  DL-Lactide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 英文名稱(chēng)HumanAILR3(h)ELISAKIT人AILR3規(guī)格：96T/48T

L-(-)-交酯(>98.0%(T))  L-(-)-Lactide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 英文名稱(chēng)HumanAILR4ELISAKIT人AILR4規(guī)格：96T/48T

δ-戊內(nèi)酯(>98.0%(GC))  δ-Valerolactone  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱(chēng)Humanai-melanocyteELISAKit人黑色素細(xì)胞抗體(melanocyte)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1,3-雙(六氟-α-羥基異丙基)苯(>98.0%(GC))  1,3-Bis(hexafluoro-α-hydroxyisopropyl)benzene  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱(chēng)HumanainuclearaibodyELISAKIT人抗核抗體(ANA)規(guī)格：96T/48T
英文名稱(chēng)HumanAdenosineiphosphatase人ATP酶規(guī)格：96T/48T 雙酚 C(>98.0%(GC))  2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

英文名稱(chēng)Humanadiponectin人脂聯(lián)素(adiponectin)規(guī)格：96T/48T 4,4'-異亞丙基二苯氧基乙酸(>98.0%(HPLC)(T))  4,4'-Isopropylidenediphenoxyacetic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

英文名稱(chēng)HumanAdiponectin人脂聯(lián)素(ADT)規(guī)格：96T/48T 四雙酚A(>98.0%(GC)(T))  Tetrabromobisphenol A  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

英文名稱(chēng)HumanAEA(IgG,M)人抗內(nèi)膜抗體(AEA)規(guī)格：96T/48T 四雙酚A雙(2-羥乙基)醚(>93.0%(GC))  Tetrabromobisphenol A Bis(2-hydroxyethyl) Ether  質(zhì)量規(guī)格：>93.0%(GC)

英文名稱(chēng)HumanAGRP人Agoi相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 4,4'-(六氟異亞丙基)二酞酸酐(>98.0%(GC)(T))  4,4'-(Hexafluoroisopropylidene)diphthalic Anhydride  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

英文名稱(chēng)Humanaicardiacmuscleaibody人抗心肌抗體(CMA)規(guī)格：96T/48T 3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T))  3,3',4,4'-Benzophenonetetracarboxylic Dianhydride  質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(T)

英文名稱(chēng)HumanAIL(h)人AIL規(guī)格：96T/48T 三環(huán)[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(>98.0%(GC))  Tricyclo[6.4.0.02,7]dodecane-1,8:2,7-tetracarboxylic Dianhydride  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

英文名稱(chēng)HumanAILR1(h)人AILR1規(guī)格：96T/48T ε-己內(nèi)酯(>99.0%(GC))  ε-Caprolactone  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)

英文名稱(chēng)HumanAILR2(h)人血小板**素(TPO)規(guī)格：96T/48T β-丙內(nèi)酯(>95.0%(GC)(T))  β-Propiolactone  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)(T)

英文名稱(chēng)HumanAILR3(h)人AILR3規(guī)格：96T/48T DL-丙交酯(>98.0%(T))  DL-Lactide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)
PrimaCell?人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞試劑盒培養(yǎng) 規(guī)格6次/盒

PrimaCell?人滑膜細(xì)胞試劑盒保存 規(guī)格6次/盒

PrimaCell?人骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞試劑盒實(shí)驗(yàn) 規(guī)格6次/盒
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、小鼠骨髓巨噬細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。