冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務標準。

保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

無水二氫鈉（標準品）   Dihydrogen Phosphate Anhydrous  質量規(guī)格：供檢查用 小鼠山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒 ，英文名： SDH ELISA Kit

長春西?。藴势罚?span>  Vinpocetine  質量規(guī)格：含量測定 小鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒 ，英文名： ENA-78/CXCL5 ELISA Kit

枸櫞酸鉍雷尼替?。藴势罚?span>  Ranitidine bismuth   質量規(guī)格：供檢查用 小鼠少突膠質細胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)ELISA試劑盒 ，英文名： OMgp-Ab ELISA Kit

丹曲林鈉（標準品）  Dantrolene  hemiheptahydrate  質量規(guī)格：含量測定 小鼠神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒Mouseglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 96T/48T

呱西替柳（標準品）  Guacetisal  質量規(guī)格：含量測定 小鼠神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒 ，英文名： GFAP ELISA Kit

鹽酸黃酮哌酯（標準品）  Flavoxate   質量規(guī)格：含量測定 小鼠神經(jīng)趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒 ，英文名： fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit

3-甲基黃酮-8-羧酸（標準品）  3-Methylflavone-8-carboxylic acid  質量規(guī)格：供檢查用 小鼠神經(jīng)生長導向因子Slit2ELISA檢測試劑盒MouseNeuronalChemorepelleSlit2ELISAKit 96T/48T

鹽酸番茄堿（標準品）  Tomatidine   質量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品 小鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA檢測試劑盒MouseNervegrowthfactor,NGFELISAkit 96T/48T

鹽酸頭孢唑蘭  Cefozopran   質量規(guī)格：>97%,BR 小鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒 ，英文名： NGF ELISA Kit

阿嗪米特（標準品）  Azintamide  質量規(guī)格：含量測定 小鼠神經(jīng)生長因子前體(proNGF)ELISA試劑盒 ，英文名： proNGF ELISA Kit
小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA檢測試劑盒Mousepigmeepithelium-derivedfactor,PEDF 96T/48T 普伐他汀四甲基丁胺（標準品）  Pravastatin1,1,3,3-tetramethylbutylamine  質量規(guī)格：含量測定

小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 ，英文名： PEDF ELISA Kit 鹽酸伊托必利（標準品）  Itopride   質量規(guī)格：含量測定

小鼠沙眼衣原體抗體IgG(CT IgG)ELISA試劑盒 ，英文名： CT IgG ELISA Kit 福辛普利鈉（標準品）  Fosinopril   質量規(guī)格：含量測定

小鼠山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒 ，英文名： SDH ELISA Kit 無水二氫鈉（標準品）   Dihydrogen Phosphate Anhydrous  質量規(guī)格：供檢查用

小鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒 ，英文名： ENA-78/CXCL5 ELISA Kit 長春西?。藴势罚?span>  Vinpocetine  質量規(guī)格：含量測定

小鼠少突膠質細胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)ELISA試劑盒 ，英文名： OMgp-Ab ELISA Kit 枸櫞酸鉍雷尼替?。藴势罚?span>  Ranitidine bismuth   質量規(guī)格：供檢查用

小鼠神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒Mouseglialfibrillaryacidicprotein,GFAP 96T/48T 丹曲林鈉（標準品）  Dantrolene  hemiheptahydrate  質量規(guī)格：含量測定

小鼠神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒 ，英文名： GFAP ELISA Kit 呱西替柳（標準品）  Guacetisal  質量規(guī)格：含量測定

小鼠神經(jīng)趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒 ，英文名： fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 鹽酸黃酮哌酯（標準品）  Flavoxate   質量規(guī)格：含量測定

小鼠神經(jīng)生長導向因子Slit2ELISA檢測試劑盒MouseNeuronalChemorepelleSlit2 96T/48T 3-甲基黃酮-8-羧酸（標準品）  3-Methylflavone-8-carboxylic acid  質量規(guī)格：供檢查用
小鼠腎上皮細胞保存 規(guī)格5×105

小鼠膀胱平滑肌細胞實驗 規(guī)格5×105

小鼠腎小管上皮細胞說明書 規(guī)格5×105
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2小鼠前列腺上皮細胞保存.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。