冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株；(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
     發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、售后服務標準。
     保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮細胞株，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

鹽酸美西律（標準品）  Mexiletine   質量規(guī)格：含量測定 大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit 96T/48T

美洛西林鈉  Mezlocillin   質量規(guī)格：>96%,CP,BR 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit 96T/48T

美洛西林鈉(標準品)  Mezlocillin   質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品 大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISAKit 96T/48T

米非司酮  Mifepristone  質量規(guī)格：>98.5%,BR 大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1AELISAKit 96T/48T

米非司酮（標準品）  Mifepristone  質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-ⅡELISAKit 96T/48T

米氮平  Mirtazapine  質量規(guī)格：>99%,BR 大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA檢測試劑盒RatOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit 96T/48T

米氮平(標準品)  Mirtazapine  質量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品 大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA檢測試劑盒RatCrosslaps,CrELISAKit 96T/48T

5-氟乳清酸；5-FOA  5-Fluoroorotic acid,5-FOA  質量規(guī)格：>99%,BR 大鼠骨橋素(OPN)ELISA檢測試劑盒RatOsteopoin,OPNELISAKit 96T/48T

枸櫞酸莫沙比利(標準品)  Mosapride   質量規(guī)格：≥98%,標準品用于含量測定 大鼠骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISA檢測試劑盒RatBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISAKit 96T/48T

枸櫞酸莫沙比利  Mosapride   質量規(guī)格：≥98.5%,BR,二水合物 大鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA檢測試劑盒Ratbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit 96T/48T
大鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA檢測試劑盒RatOsteoprotegerinLigand,OPGL 96T/48T 鹽酸美西律（慢心率）  Mexiletine   質量規(guī)格：>98%,BR

大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein2,BMP-2 96T/48T 鹽酸美西律（標準品）  Mexiletine   質量規(guī)格：含量測定

大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein4,BMP-4 96T/48T 美洛西林鈉  Mezlocillin   質量規(guī)格：>96%,CP,BR

大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein7,BMP-7 96T/48T 美洛西林鈉(標準品)  Mezlocillin   質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1A 96T/48T 米非司酮  Mifepristone  質量規(guī)格：>98.5%,BR

大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-Ⅱ 96T/48T 米非司酮（標準品）  Mifepristone  質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA檢測試劑盒RatOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGP 96T/48T 米氮平  Mirtazapine  質量規(guī)格：>99%,BR

大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA檢測試劑盒RatCrosslaps,Cr 96T/48T 米氮平(標準品)  Mirtazapine  質量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

大鼠骨橋素(OPN)ELISA檢測試劑盒RatOsteopoin,OPN 96T/48T 5-氟乳清酸；5-FOA  5-Fluoroorotic acid,5-FOA  質量規(guī)格：>99%,BR

大鼠骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISA檢測試劑盒RatBone-specificAlkphaseB,ALP-B 96T/48T 枸櫞酸莫沙比利(標準品)  Mosapride   質量規(guī)格：≥98%,標準品用于含量測定
大鼠心肌組織提取物【Rat Heart: Normal Heart Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg

大鼠腸靜脈組織提取物胞【Rat Intestinal: Normal Intestinal Vein Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg

大鼠胃粘膜組織提取物【Rat Gastric: Normal Gastric Mucosal Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
A-375：惡性黑色素瘤細胞實驗細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。