細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
hFoB1.19:SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn) |
規(guī)格 |
T25m2 |
貨號(hào) |
BJ-X63272 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株;(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮細(xì)胞株,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
抑霉唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Imazalil 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛(EPI)試劑盒 Bovine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit
春雷霉素鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品) Kasugamycin 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥90% (HPLC) 牛(NO)試劑盒 Bovine Niic Oxide,NO ELISA Kit
標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%) Kitazine solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4% 牛0酸甘油酸酯激酶2(PGK2)試劑盒 Bovine Phosphoglycerate kinase 2,PGK2 ELISA kit
利谷?。?biāo)準(zhǔn)品) Linuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛0酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測(cè)試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFKELISAKit 96T/48T
苯噻草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Mefenacet 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5% 牛0酸果糖激酶(PFK)試劑盒 Bovine Phosphofructokinase,PFK ELISA Kit
甲磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%) Metsulfuron-methyl solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4% 牛0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)試劑盒 Bovine pAMPK ELISA Kit
甲霜靈(標(biāo)準(zhǔn)品) Metalaxyl 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98% 牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)ELISA檢測(cè)試劑盒Bovinephosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCKELISAKit 96T/48T
甲氧?。?biāo)準(zhǔn)品) Metoxuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)試劑盒 Bovine phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit
滅草?。?biāo)準(zhǔn)品) Monuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛1試劑盒 Bovine Coisone ELISA Kit
煙嘧磺?。?biāo)準(zhǔn)品)
Nicosulfuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛ELISA試劑盒
內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyEndothelin1,ET-1
96T/48T 異標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%) Iprobenfos
standard solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6%
牛(EPI)試劑盒 Bovine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit 抑霉唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Imazalil 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
牛(NO)試劑盒 Bovine Niic Oxide,NO ELISA Kit 春雷霉素鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品) Kasugamycin 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥90% (HPLC)
牛0酸甘油酸酯激酶2(PGK2)試劑盒 Bovine Phosphoglycerate kinase 2,PGK2 ELISA kit 標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%) Kitazine solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4%
牛0酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測(cè)試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFK 96T/48T 利谷隆(標(biāo)準(zhǔn)品) Linuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
牛0酸果糖激酶(PFK)試劑盒 Bovine Phosphofructokinase,PFK ELISA Kit 苯噻草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Mefenacet 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%
牛0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)試劑盒 Bovine pAMPK ELISA Kit 甲磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%) Metsulfuron-methyl solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4%
牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)ELISA檢測(cè)試劑盒Bovinephosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCK 96T/48T 甲霜靈(標(biāo)準(zhǔn)品) Metalaxyl 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%
牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)試劑盒 Bovine phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit 甲氧?。?biāo)準(zhǔn)品) Metoxuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
hFoB1.19:SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn)牛1試劑盒 Bovine Coisone ELISA Kit 滅草?。?biāo)準(zhǔn)品) Monuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物【Rat Airway:
Normal Bronchial Fibroblast Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Rat Lung: Normal Vein Endothelial Cell Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
大鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞提取物 【Rat Airway: Normal Bronchial and Tracheal Epithelial Cell Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg