冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
     發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
     保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮細(xì)胞株，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

增甘磷(>97.0%(T))  Glycine-N,N-bis(methylenephosphonic Acid)  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T) 人胞質(zhì)動(dòng)力蛋白(CD)試劑盒 Human cytoplasmic dynein,CD ELISA kit

N-甲基亞氨二乙酸(>98.0%(GC)(T))  N-Methyliminodiacetic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) 人本周蛋白(BJP)試劑盒 Human Bence-Jones protein,BJP ELISA Kit

氮基三乙酸二鈉鹽(>99.0%(T))  Nitrilotriacetic Acid Di Salt  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(T) 人苯氨酸(LPA)ELISA檢測試劑盒HumanL-phenylalanine,LPAELISAKit 96T/48T

N-(2-羧乙基)亞氨基二乙酸(>98.0%(T))  N-(2-Carboxyethyl)iminodiacetic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 人苯諾龍/苯去甲(NP)試劑盒 Human Nandrolone Phenylpropionate,NP ELISA Kit

三乙四胺-N,N,N',N'',N''',N'''-六乙酸(>98.0%(T))  Triethylenetetramine-N,N,N',N'',N''',N'''-hexaacetic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 人鼻病毒(RV)抗體(IgA)試劑盒 Human rhinovirus(RV)aibody(IgA)ELISA kit

TAN[=1-(2-噻唑偶氮)-2-萘酚](>99.0%(T))  TAN [=1-(2-Thiazolylazo)-2-naphthol]  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(T) 人吡哆/吡哆醇維生素B60酸酶(PDXP)試劑盒 human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase,PDXP ELISA Kit

二甲基偶氮磺III  Dimethylsulfonazo III  質(zhì)量規(guī)格：堿性稀土金屬用的分光光度試劑及硫酸根用鋇的沉淀滴定指示劑 人吡哆/吡哆醇維生素B6激酶(PDXK)試劑盒 human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-kinase,PDXK ELISA Kit

偶氮磺III(>90.0%(HPLC))  Sulfonazo III   質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(HPLC) 人臂板蛋白3A(Sema 3A)試劑盒 Human Sema 3A ELISA Kit

2-(4-磺基苯偶氮）-1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸三鈉鹽水合物(>95.0%(HPLC))  3 2-(4-Sulfophenylazo)-1,8-dihydroxynaphthalene-3,6-disulfonate Hydrate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC) 人臂板蛋白3F(S3F)試劑盒 Human S3F ELISA Kit

2,2'-二羥基偶氮苯(>98.0%(T))  2,2'-Dihydroxyazobenzene  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 人臂板蛋白4C(Sema 4C)試劑盒 Human Sema 4C ELISA Kit
人胞漿球蛋白(CIg)ELISA檢測試劑盒Humancytoplasmicimmunoglobulin,CIg 96T/48T CPC一水合物(=西吡氯銨一水合物)(>98.0%(HPLC)(T))  CPC Monohydrate (=Cetylpyridinium Chloride Monohydrate)  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

人胞漿型0脂酶A2-α(cPLA2-α)試劑盒 Human cytosolic phospholipase A2-α,cPLA2-α ELISA Kit 百里酚酞氨羧絡(luò)合劑  Thymolphthalein Complexon  質(zhì)量規(guī)格：螯合劑

人胞外超氧化物歧化酶(SOD3)試劑盒 Human Exacellular superoxide dismase [Cu-Zn](SOD3)ELISA kit 鈣黃綠素藍(lán)(>98.0%(T))  Calcein Blue  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

人胞質(zhì)動(dòng)力蛋白(CD)試劑盒 Human cytoplasmic dynein,CD ELISA kit 增甘磷(>97.0%(T))  Glycine-N,N-bis(methylenephosphonic Acid)  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

人本周蛋白(BJP)試劑盒 Human Bence-Jones protein,BJP ELISA Kit N-甲基亞氨二乙酸(>98.0%(GC)(T))  N-Methyliminodiacetic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

人苯氨酸(LPA)ELISA檢測試劑盒HumanL-phenylalanine,LPA 96T/48T 氮基三乙酸二鈉鹽(>99.0%(T))  Nitrilotriacetic Acid Di Salt  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(T)

人苯諾龍/苯去甲(NP)試劑盒 Human Nandrolone Phenylpropionate,NP ELISA Kit N-(2-羧乙基)亞氨基二乙酸(>98.0%(T))  N-(2-Carboxyethyl)iminodiacetic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

人鼻病毒(RV)抗體(IgA)試劑盒 Human rhinovirus(RV)aibody(IgA)ELISA kit 三乙四胺-N,N,N',N'',N''',N'''-六乙酸(>98.0%(T))  Triethylenetetramine-N,N,N',N'',N''',N'''-hexaacetic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

人吡哆/吡哆醇維生素B60酸酶(PDXP)試劑盒 human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase,PDXP ELISA Kit TAN[=1-(2-噻唑偶氮)-2-萘酚](>99.0%(T))  TAN [=1-(2-Thiazolylazo)-2-naphthol]  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(T)

人吡哆/吡哆醇維生素B6激酶(PDXK)試劑盒 human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-kinase,PDXK ELISA Kit 二甲基偶氮磺III  Dimethylsulfonazo III  質(zhì)量規(guī)格：堿性稀土金屬用的分光光度試劑及硫酸根用鋇的沉淀滴定指示劑
人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物【The Human Brain: Normal Brain Artery Endothelial Cell Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg

人胰腺上皮細(xì)胞提取物【Human Pancreas : Normal Pancreatic Epithelial Cell Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg

人直腸癌組織源細(xì)胞提取物【Human Cancer: Rectum Cancer Tissues CellsDerivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
NCI-H446小細(xì)胞肺癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。